F2 ошибка атлант: Ошибка F2 в холодильнике Атлант – что делать

Ошибка стиральной машинки Atlant F2. Причина, поломки, ремонт.

В последний раз ошибкой на стиральную машинку Atlant интересовались сегодня с 05:35. Если у вас появилась ошибка Atlant F2, которая отображена на дисплее – в можете узнать официальную причину из документации производителя, а также как ее можно устранить самим. В целом машинки марки Atlant достаточно надежные, но есть процент брака и уязвимых мест которые обязательно знать каждому кто владеет данной машинкой.

Описание ошибки: Ошибка F2 в СМА Атлант, чаще всего, загорается через 10-15 минут после запуска стирки. Машинка набирает воду, крутит барабан, но вода не нагревается. Вы можете проверить это, прикоснувшись к стеклу люка. Иногда Ф2 высвечивается после окончания программы, при этом также можно заметить, что нагрева не было – машинка стирала вещи в холодной воде.
Если у вашей Атлант нет экрана, то об ошибке она сообщит при помощи лампочек этапов выполнения программы.

В моделях Atlant SoftControl. Будет гореть или мигать индикатор «Остановка с водой».
В СМА серии Atlant OptimaControl. Загорится светодиод «Полоскание».
Код F2 в машинах Атлант сообщает об обрыве сигнала в цепи датчика температуры (NTC).

При появлении ошибки F2, не стоит переживать и бить тревогу. Решить проблему можно достаточно просто самим либо обратившись к мастеру. Ремонт не будет столь дорогой если сравнивать даже с покупкой новой стиральной машинки.

Как устранить ошибку Atlant F2

Изредка код F2 может возникать без поломки: из-за «глюка» управляющей платы. Чтобы избавиться от ошибки необходимо перегрузить СМА. Для этого отключите ее от электросети на 10-15 минут. Если после включения код исчезнет – дело было в «подвисшей» плате, и ваша машинка в порядке: пользуйтесь ей далее как обычно. Если же F2 появилась вновь – к сожалению, придется вызывать мастера.

В форму ниже у вас есть возможность написать отзыв или отклик о том как вы решили ошибку и как она появилась. Мы публикуем любые правдивые и адекватные отзывы о стиральных машинках Atlant.

Внимание! Возможно именно Ваш отзыв может предупредить других и помочь в решении проблемы!

Илья Сергеевич Дорофеев

Поддержка от мастера по ремонту Техник по диагностике и ремонту Atlant Стаж: 18 лет Помогу решить любые вопросы возникшие с ошибками F2 по машинке Atlant. Опишите подробно ситуацию форме ниже и я лично вам отвечу в течении дня. Обязательно укажите номера ошибок, симптомы, полная модель и что делали до появления ошибки. Будем благодарны взамен если поделитесь ссылкой с друзьями:

Коды ошибок стиральных машин ATLANT с расшифровкой

Код	Описание проблемы	Возможные неисправности	Возможные методы решения
Sel У СМА без дисплея индикация отсутствует	Машина не выполняет заданную программу.	Временные неполадки в работе электронного контроллера. Выход из строя селектора интерфейсного модуля	Выключить машину и включить ее заново через несколько минут. Проверить модуль индикации и селектор программ. При необходимости — произвести ремонт или замену указанных компонентов.
None У бездисплейных машин, например, у ATLANT 60У108, включены все индикаторы	Стиральная машина «зависает» на середине стирки.	Техника реагирует на очень большое количество пены внутри барабана.	Убедиться, что выбранный режим стирки соответствует количеству набранной воды. Выставить адекватный рабочий режим, запустить программу заново. Убедиться в том, что выбранное моющее средство предназначено для автоматической стирки. Впредь засыпать достаточное, но не чрезмерное количество порошка (либо пользоваться уже дозированными средствами, например, капсулами).
F2 (Ф2) Светится индикатор № 3	Стиральная машина набирает, но не нагревает воду в процессе стирки, спустя 10-15 минут после начала выполнения рабочей программы начинает высвечивать указанную ошибку.	Проблемы с датчиком температуры.	Выключить и, спустя некоторое время, запустить заново. Проверить температурный датчик, в том числе, его проводку и контакты. В крайнем случае, провести диагностику модуля управления, его ремонт или замену.
F3 (Ф3) Включены 3-й и 4-й индикаторы		Перегорел или пробивает на корпус током ТЭН. Отказал термодатчик и его сигналы не считывает плата. «Залипло» реле ТЭНа и вышел из строя блок управления.	Исключить возможность перепада напряжения в сети (установить внешний стабилизатор). Проверить проводку в цепи нагрева «ТЭН — термодатчик — блок управления», устранить проблемы. Осмотреть термодатчик: его контакты и проводку. Проверить работу самого блока управления, при необходимости — произвести ремонт.
F4 (Ф4) У машин без дисплея, таких как ATLANT 50У108, активен индикатор 2	Машина не сливает отработанную воду.	Перебои в работе блока управления. Проблемы с канализацией. Неисправность системы слива.	Отключить устройство от сети питания, выдержать паузу в 15-20 минут, запустить процесс заново. Убедиться, что не произошло засора в канализационной трубе. При его наличии устранить. Осмотреть сливной шланг на предмет перегибов, заломов и прочих видов деформации. Если есть дефекты — лучше заменить шланг на новый. Снять и промыть сливной фильтр, установить его на место. Осмотреть проводку сливной системы (электроцепь сливного насоса).
F5 (Ф5) Светятся индикаторы 2 и 4	Стиральная машина не набирает воду и не приступает к выполнению заданной программы.	Проблемы с подачей воды. Временный сбой в работе управляющей платы. Неисправность системы водонабора.	Убедиться в том, что в водопроводе есть вода, ее напор достаточен, вентиль подачи воды открыт в достаточной степени. Перезапустить программу стирки для того, чтобы устранить сбой платы управления. Осмотреть и устранить дефекты шланга подачи воды. Снять и промыть фильтр-сетку клапана залива (он часто известкуется и забивается частицами мусора, содержащимися в водопроводной воде). Установить фильтр на место.
F6 (Ф6) Активны индикаторы № 2 и 3	Машина не вращает барабан, либо крутит его только в одну сторону.	Неполадки в цепи мотора. Чрезмерная степень износа щеток. Проблемы с блоком управления.	Осмотреть щетки: они обычно стираются с течением времени, в таком случае их приходится менять на новые. Проверить проводку двигателя: она может быть неисправна из-за вибрации машины, в силу перегорания контактов или (если машина стоит на первом этаже или в частном доме) попорчена мышами. Устранить повреждения. Провести диагностику блока управления и всех его компонентов. Заменить пострадавший новой деталью.
F7 (Ф7) У машинок без дисплея светятся диоды 2, 3, 4	Стиральная машина Атлант не реагирует на команды в самом начале стирки.	Проблемы с электропитанием.	Проверить исправность питающей розетки и уровень напряжения в сети, обеспечить машину внешним стабилизатором. Убедиться в том, что стиральная машина изначально была подключена правильно: категорически не рекомендуется делать это при помощи удлинителей. Перезапустить программу стирки заново, чтобы устранить временный сбой работы электронного модуля.
F8 (Ф8) Активен индикатор № 1	Сразу после установки программы или некоторое время спустя машина начинает работу, но выдает ошибку.	В баке наблюдается чрезмерный налив воды.	Проверить прессостат — датчик уровня воды. Возможно он не «понимает», что воды очень много (прочистить камеру датчика, устранить дефекты шланга прессостата). Произвести ремонт или замену датчика. Проверить клапан набора воды. Он не должен пропускать воду в закрытом состоянии, но при поломках это происходит. Если машина не включается с самого начала — проверить компоненты блока управления, произвести их ремонт.
F9 (Ф9) Срабатывание индикаторов 1 и 4	Машина отказывается вращать барабан.	Неправильная эксплуатация. Ошибка таходатчика. Сбой работы управляющей платы.	Открыть барабан и убедиться в том, что машина не перегружена бельем (уточнить в инструкции). Осмотреть распределение стираемого белья (оно должно равномерно распределяться по стенкам барабана, а не скручиваться в большой комок). Перезапустить программу заново, чтобы устранить временный сбой платы управления. Проверить электронный контроллер, тахогенератор, щетки двигателя, его проводку и контакты. Устранить обнаруженные неполадки, компоненты, непригодные для дальнейшей эксплуатации заменить новыми.
F10 (Ф10) При отсутствии дисплея работают диоды 1 и 3	Стиральная машина после подачи команды к началу работы не делает этого, либо совершает попытку забрать воду, но не делает этого до конца, барабан не вращается.	Проблемы с устройством блокировки люка (УБЛ).	Открыть дверцу люка и плотно захлопнуть его заново. Дождаться характерного щелчка. Если этого не происходит, осмотреть все механические детали (гнездо, крючок на дверце). В случае попадания внутрь посторонних предметов — устранить их, деформированный крючок заменить новым. Осмотреть резиновые манжеты люка и заменить их новыми, если они имеют дефекты. Перезапустить машину, предварительно выключив ее на несколько минут. Осмотреть компоненты УБЛ и модуля управления: резисторы, диоды, симистор замка, устранить поломки.
F11 (Ф11)	Машина не начинает стирку в начале программы.	Открыт люк стиральной машины.	Закрыть люк более плотно, убедившись, что в замок не попало посторонних предметов. Перезапустить программу стирки заново.
F12 (Ф12) У машин без дисплея происходит срабатывание 1-го и 2-го индикаторов одновременно	В начале, на стадии стирки или на отжиме машина прекращает выполнять работу, барабан крутится медленно или не крутится вообще, барабан не может набрать обороты. Порой возникновение этой ошибки может приводить к «выбиванию» пробок.	Проблемы в работе двигателя. Скачки напряжения.	Убедиться в том, что угольные щетки не стерлись в процессе амортизации, не искрят. В этом случае их придется заменить новыми. Убедиться, что не пострадала прошивка блока управления (часто происходит по причине неадекватного напряжения в сети). Если это так — придется провести перепрошивку. Проверить контакты и проводку двигателя, устранить дефекты. Если СМ выбивает пробки — есть утечка тока на корпус с мотора. При этом чаще всего меняют мотор.
F13 (Ф13) Срабатывание индикации в позиции 1, 2, 4-й диоды	После запуска программы машина перестает реагировать на какие- либо команды, но стирку при этом не начинает.	Сбой платы управления. Поломка модуля индикации. Сбой памяти.	Перезапустить программу заново, выждав около 10 минут. Проверить дорожки электронного контроллера. Осмотреть контакты и элементы модуля, при неисправности произвести ремонт. Перепрограммировать память блока управления.
F14 (Ф14) Светятся индикаторы № 1 и 2	Ошибка высвечивается непосредственно после включения. Нет реакции на нажатие кнопок.	Отсутствует контакт между блоком индикации и блоком управления. Временный сбой в работе платы управления.	Перезапустить машину, выключив предварительно из электросети на 10-15 минут. Проверить контакты в цепи «блок индикации — блок управления». Устранить дефекты цепи.
F15 (Ф15)	Стиральная машина внезапно останавливает свою работу (может происходить на любом этапе стирки).	Срабатывание системы АкваСтоп. Характерно только для стиральных машин, оснащенных системой Аквастоп, например, ATLANT 60У1010, ATLANT 70С1010.	Отключить стиральную машину, обесточив ее полностью. Осмотреть все компоненты, которые призваны обеспечивать герметичность: шланги, узлы и проч. Устранить причину течи. Запустить программу заново. Если меры не сработали — осмотреть контакты и проводку системы АкваСтоп, возможно причина именно в ней. Устранить дефекты.
F16 (Ф16)	Стиральная машина перегревает воду.	Временный сбой платы управления. Неисправность датчика температуры.	Перезапустить рабочую программу заново, при этом обратить особое внимание на температуру выбранной программы. Если указанные действия не привели к желаемому результату — проверить исправность работы температурного датчика, устранить неисправности или заменить новой деталью.
Door Активны индикаторы № 1, 3, 4	Машина не начинает выполнение рабочей программы	Неплотно закрыта дверь люка. Дверца закрыта, но машина этого «не понимает».	Открыть и закрыть люк заново, убедившись, что внутрь уплотнителя не попали посторонние предметы, закрытию не мешает загруженная внутрь одежда. Выключить аппарат из сети, подождать несколько минут, попытаться запустить рабочую программу заново. Если не помогло, проверить работу УБЛ, прозвонив проводку и осмотрев контакты. Продиагностировать электронный контроллер. Если необходимо — дефектные компоненты заменить.

Коды ошибок стиральных машин Атлант: расшифровка неисправностей

Покупая стиральную машину, можно сэкономить, если остановить свой выбор на моделях отечественной фирмы «Атлант». Более 20 лет эта компания успешно производит холодильники и морозильные камеры, а с 2004 года приступила к выпуску стиральных установок.

Современные модели стиральных машин «Атлант» оснащены специальным дисплеем, на котором в случае неисправности появляются информационные коды

При производстве отечественной техники используются самые новые технологии, поэтому стиральные машины «Атлант» практически ни в чем не уступают своим зарубежным аналогам. Все модели оснащены современной системой самодиагностики, которая позволяет быстро установить причину неисправности.

Стиральные установки могут иметь полноценный дисплей со светодиодной индикацией (модели 50с81, 45у102, 50с102, 50с82, 45у82, 50у102), небольшой сегментный дисплей (модель 50у87), а также быть без дисплея (модели 35м101, 50у88). Машины, на приборной панели которых есть табло, при возникновении поломки выводят на него информационный код в виде буквенного или буквенно-цифрового сочетания. Модели без дисплея передают код ошибки при помощи сигналов четырех световых индикаторов.

Производители стиральных машин не рекомендуют устранять какие-либо неисправности самостоятельно без предварительного ознакомления с инструкцией по эксплуатации.

В нашей статье мы перечислим основные коды ошибок стиральных машин «Атлант», расскажем, что они означают и как можно самостоятельно устранить некоторые из них.

Перечень информационных кодов и их расшифровка

Самые серьезные нарушения в работе, связанные с поломкой основных деталей стиральной машины, обозначаются кодами F3, F4, F5, F9, F12 и F13. Для устранения таких неисправностей нужно вызвать специалиста на дом или отвести технику в ремонт. При появлении остальных кодов отремонтировать технику в большинстве случаев можно самостоятельно.

Код ошибки Door

Информационный код Door, появившийся на дисплее стиральной машины, говорит о том, что люк не закрыт. При обозначении кода световыми индикаторами будут одновременно гореть первая, третья и четвертая лампочки.

Причиной появления ошибки может быть попадание в просвет люка или в замок одежды либо посторонних предметов. Если после проверки дверь все равно не закрывается, значит неисправность может крыться в механизме замка, ослабленной петле дверцы или модуле управления. Также может деформироваться резиновая манжета, расположенная внутри люка.

Резиновая манжета, расположенная в люке стиральной машины, со временем деформируется и может мешать закрытию дверцы

Замену замка, петли и манжеты, а также тестирование модуля управления лучше поручить профессионалам.

Код ошибки Sel

В том случае, если происходит сбой в работе селектора программ или нарушается связь между кнопками управления на приборной панели и контроллером, на табло появляется информационный код Sel. В моделях без дисплея при таких неисправностях не будет гореть ни один световой индикатор.

Самостоятельно можно попробовать перезагрузить стиральную машину – отключить ее от сети и подключить снова через 10-15 минут. Если такие манипуляции не помогли, нужно вызывать специалистов по ремонту.

Код ошибки None

Свечение одновременно всех индикаторов на панели без дисплея или появление на табло буквенного кода None означает, что в барабане слишком много пены.

Если в барабане стиральной машины «Атлант» образуется слишком много пены, на дисплее высвечивается код ошибки None

Возможная причина повышенного пенообразования – использование избыточного количества моющего средства или его низкое качество. Машина может сама «снять» ошибку, когда через какое-то время пена осядет. Также можно, не дожидаясь продолжения стирки, слить воду, выгрузить белье и тщательно промыть барабан и отсек стиральной машины, после чего загрузить белье снова. Аварийный слив выполняется через сливной шланг или аварийный патрубок.

Коды ошибок F2 и F3

Информационные коды F2 и F3 означают проблемы с нагревом воды. В машинах без дисплея код F2 обозначается свечением третьего по счету светодиода, код F3 – третьего и четвертого индикаторов.

ТЭН стиральной машины часто выходит из строя из-за образования известкового налета на его трубках

Причинами появления ошибок F2 и F3 могут быть: поломка датчика температуры либо ТЭНа (трубчатого электронагревателя) или нарушение связи между этими деталями с модулем управления стиральной машиной. Такие неисправности вряд ли удастся устранить самостоятельно – потребуется вызов специалиста.

Код ошибки F4

Ошибка F4 означает проблемы со сливом воды. В машинах без табло о таких неисправностях скажет свечение второго индикатора. Причины плохого слива или его отсутствия могут заключаться в поломке насоса, засорении сливного шланга или фильтра, а иногда и в засорении самой канализации.

Причиной плохого слива воды может быть засор в сливном фильтре

При возникновении ошибки F4 можно самостоятельно проверить проходимость сливного шланга и фильтра, канализацию. Ремонт помпы лучше поручить профессионалам.

Код ошибки F5

Появление на экране информационного кода F5 означает проблемы с поступлением воды в стиральную машину. На установках без дисплея при такой неполадке светятся второй и четвертый индикаторы.

Причинами неисправности может быть засорение шланга подачи воды или фильтра, отсутствие воды в водопроводе, поломка впускного клапана или нарушения в работе модуля управления. Самостоятельно «снять» ошибку можно, проверив напор воды, прочистив шланг и фильтр от мусора. Для устранения других неисправностей лучше вызвать мастера.

Код ошибки F8

Если на мониторе стиральной машины появляется код F8, это значит, что на модуль управления поступил сигнал о переполнении бака. Свечение первого индикатора на машинах без табло сигнализирует об этой же проблеме.

Причинами возникновения ошибки может быть как фактическое переполнение бака (например, когда заблокирован в открытом положении впускной клапан), так и сбои в работе приборов при нормальном количестве воды (например, когда неисправен прессостат, или есть неполадки в модуле управления). В любом случае устранение неисправности лучше поручить специалисту.

Код ошибки F9

Код F9 означает поломку тахогенератора – датчика, отвечающего за частоту вращения электродвигателя. Одновременное свечение первого и четвертого индикаторов будет обозначать ту же ошибку в машинах, не оснащенных дисплеем.

Таходатчик контролирует частоту вращений электродвигателя

Мастера по ремонту стиральных машин должны будут проверить работу датчика, самого двигателя и управляющей платы и при необходимости заменить неисправные детали.

Код ошибки F12

Код F12 или свечение первого и второго индикаторов – обозначения ошибки, связанной с серьезными неисправностями техники. Такие сигналы говорят о поломке двигателя стиральной машины.

Коды ошибок F13 и F14

Коды ошибок F13 и F14 свидетельствуют о неисправности в модуле управления стиральной машиной. Первая ошибка обозначается свечением первого, второго и четвертого индикаторов, вторая – свечением первого и второго. Чтобы устранить поломку, мастер по ремонту должен проверить целостность электрических цепей и сам электронный модуль.

Таблица с кодами ошибок

В таблице, размещенной ниже, мы перечислили все коды ошибок стиральных машин «Атлант», возможные проблемы и причины их возникновения.

Код ошибки	Проблема	Причины возникновения
Door	Дверца стиральной машины не закрыта	Попадание посторонних предметов в просвет люка, поломки в механизме замка, перекос дверцы
Sel	Не работают кнопки управления	Неисправности селектора или модуля управления
None	В баке слишком много пены	Неправильное использование порошка, его низкое качество
F2 и F3	Не нагревается вода	Неисправен датчик температуры или ТЭН
F4	Машина не сливает воду	Засорение шланга, фильтра или канализации, поломка сливного насоса или сбой в работе модуля управления
F5	Бак не наполняется	Слабый напор или отсутствие воды в водопроводе, поломка датчика уровня воды или клапана, засорение шланга или фильтра
F6	Поломка реле реверса	Неисправно реле реверса или двигатель
F7	Питающая сеть имеет неправильные параметры	Слишком низкое или высокое напряжение в сети, перепады напряжения
F8	Переполнение бака	Поломка клапана подачи воды, прессостата, модуля управления
F9	Не работает двигатель	Неисправен тахогенератор
F10	Не срабатывает блокировка люка, стирка не запускается	Поломки в механизме замка, нарушения в работе модуля управления
F12	Не работает двигатель	Неисправности в двигателе, его обмотке или модуле управления
F13 и F14	Поломка модуля управления	Обрыв электрических цепей, поломка модуля
F15	Утечка воды	Нарушение герметичности бака, шлангов и их соединений, поломка датчика уровня воды

Об авторе:

Наталья Миронова

Мама, жена и просто счастливая женщина. Черпает вдохновение в путешествиях, не представляет жизни без книг и хороших фильмов. Стремится стать идеальной хозяйкой и всегда готова поделиться полученным опытом.

Нашли ошибку? Выделите её и нажмите кнопки:

Ctrl + Enter Оцените статью: Интересно!

Для стирки небольших вещей в дороге или гостинице удобно использовать обычный полиэтиленовый пакет. Носки или колготки разминают внутри завязанного пакета вместе с водой и небольшим количеством моющего средства. Такой способ позволяет предварительно замочить вещи и выполнить стирку, не повредив ткань и не потратив много порошка и воды.

Истории известен факт, когда котенок попал в барабан стиральной машины и, пройдя полный цикл стирки на программе «Шерстяные вещи», выбрался из агрегата целым и невредимым. Единственной неприятностью для домашнего питомца стала аллергия на стиральный порошок.

Существует стиральная машина «для холостяков». Белье, постиранное в таком агрегате, совсем не нужно гладить! Все дело в том, что устройство не имеет барабана: часть вещей можно разместить внутри контейнера прямо на вешалках (например, пиджаки и рубашки), а вещи поменьше (допустим, белье и носки) – на специальных полочках.

Выражение «мыльная опера» («мыло») возникло не случайно. Самые первые сериалы и шоу, аудиторию которых составляли женщины, транслировались по телевидению в то время, когда домохозяйки выполняли уборку, глажку и стирку. К тому же для привлечения зрительниц к экранам в эфире часто прокручивали рекламные ролики моющих средств: мыла и порошков.

В XIX веке на стирку дамских туалетов уходила масса времени. Платья предварительно распарывали, а затем стирали и сушили каждую часть отдельно, чтобы ткань не деформировалась. После стирки одежду сшивали заново.

Стиральные машины имеют отношение к возникновению выражения «отмывать деньги». В 30-е годы XX века американские гангстеры использовали сеть прачечных в качестве прикрытия своей нелегальной деятельности. Выдавая доходы от преступной деятельности за выручку, полученную от чистки одежды, они превращали «грязные» деньги в «чистые».

Существуют самые разные шарики, которые используются в стиральной машине. Антистатические не дадут ткани прилипать к телу после стирки, шарики со специальными петельками «причешут» ворсинки и предотвратят появление катышков, а силиконовые с пупырышками не дадут сваляться пуху при стирке верхней одежды.

Космонавты, находясь на орбите Земли, решают проблему грязных вещей оригинальным методом. Одежду сбрасывают с космического корабля, и она сгорает в верхних слоях атмосферы.

Стиральные машины, оснащенные функциями «Без глажения» или «Легкая глажка», могут стирать белье и при этом практически не мять его. Достигается такой эффект за счет особого подхода к отжиму – он выполняется на низких оборотах, с большими паузами, причем в баке сохраняется небольшое количество воды.

Коды ошибок атлант

Ремонт стиральных машин Атлант своими руками

Ниже, я буду отвечать на часто задаваемые вопросы, а также расскажу, какие коды ошибок, указывает на ту или иную неисправность. Обращаю ваше внимание, на то что не всегда код ошибки может правильно показать поломанную деталь. Дело в том, что функция самодиагностики, обычно проверяет не саму запчасть, а всю цепь, к которой принадлежит деталь. Например, если  на панели управления высветился код F4, то это не означает, что именно помпа сгорела, вполне возможно проблема в забитых шлангах, также бывают случаи, когда залипают контакты на прессостате (датчик уровня воды), бывает провода в обрыве или на модуле управления сгорел, какой-то резистор или симистор. Вот именно про эти тонкости мы и будем говорить дальше. Ещё одна проблема, которая вводит потребителей в кому, это как определить код ошибки стиральной машины Атлант без дисплея. Специально для этих ребят, которые являются счастливыми обладателями данной техники, я сделал фотографию, увидеть её можно чуть ниже. Я не нашел практически ни одной статьи в интернете, о том как считать код ошибки именно на этих моделях. Обратите внимание на нумерацию индикаторов, она идёт не с первой кнопки, что вводит многих начинающих мастеров в заблуждение. Возле каждого номера проставлен код ошибки, это я сделал специально, для того, чтобы разъяснить, как считываются поломки

 К примеру, если горит 1 и 4 светодиод, то обозначать он будет F9. Теперь посмотрите на обозначения на фотографии, рядом с цифрой 1 стоит F8, а рядом с цифрой 4 стоит F1, если F1 прибавить к F8, то получается наш код. Для того чтобы не путаться и не прибавлять все эти буквы f1 и f8, в интернете существует таблицы по которым можно вычислить любой код. Я не стану забивать вам голову этими нюансами, лучше на простых житейских примерах, расскажу, какая поломка принадлежит той или иной ошибке

 

Коды ошибок стиральных машин Атлант

Начну всё по порядку и вопросы буду подбирать, так чтобы вы более-менее поняли суть поломки и методы её устранения

код ошибки «door»

На машинке без табло горит 1-ый, 3-ий и 4-ый диод

Стиральная машина Атлант периодически не запускает программу, а сейчас вообще отказалась работать, покопавшись в интернете, я не нашла ошибку, которая присуща, моей машинке. Моя машинка без дисплея, то есть код ошибки не невидно, но периодически загораются 3 диода, если смотреть на машину спереди, то светится 2, 4 и 5 лампочка. Может, кто подскажет, что это за ошибка

На фото вверху я дал распиновку, как расшифровать код ошибки на стиральной машине Атлант без дисплея. По всей видимости, у вашей стиралки код ошибки «door», что означает – не плотно закрыт загрузочный люк. Бывает, другие детали выходят из строя, например на модуле управления, мог сгореть симистр или какой-либо диод. Вполне возможно, язычок люка не до конца надавливает пластину, которая расположена в самом замке. Также бывает, что сам замок глючит. Самый простой способ, поменять замок, то есть установить заведомо исправную деталь и проверить запуск машинки. Ещё можно отверткой сымитировать закрывание дверки, то есть провести тоже действие, что делает крюк люка, когда вы его закрываете, если машинка запустилась, значит проблема больше не в замке, а в том что крючок, который толкает пластину на блокировке, не может её до конца толкнуть. Это уже механическое повреждение и тут надо решать по обстоятельствам, то есть видеть, что можно сделать

 

Код ошибки «Sel»

Или горят все светодиоды на панели управления

Помогите пожалуйста в решении следующей проблемы, на дисплее засветилось слово Sel. В таблице нашел, что поломан селектор, но дело в том что машинка стирку выбирает, всё нормально, а когда начинаешь ее запускать, то высвечивается эта беда. Вызов мастера ни к чему не привел, он сказал, что надо менять модуль управления. Я вот думаю, а можно поменять этот селектор самому, ведь должны продаваться какие-то запчасти для стиральной машины, в том числе и эта гадость

Ребята я уже писал выше, что не надо воспринимать буквально то, что у вас появляется на дисплее. Кроме селектора, на панели управления находятся ещё кнопки, они могут банально западать. Если это не так, то вам очень сильно не повезло, так как селектор отдельно не поменяешь, вернее поменять можно, но отдельно от блока управления, такая запчасть не продаётся

Код ошибки  «None» и «Sel»

На Атланте без дисплея горят все лампочки

На моей стиральной машине загорелись все индикаторы, на этой модели нет цифрового табло. Я так понимаю, что пришел конец мозгам. Может у вас есть, какие-то предположения, по этому поводу

Вы не написали, когда высвечивается ошибка. Дело в том что, когда горят все индикаторы, это не означает что хана блоку. Ошибка None, обычно появляется ближе к середине стирки и означает она, что вы сильно до фига набулькали порошка, в результате пошло сильное пенавыделение. Про код ошибки «Sel», я уже рассказал выше

Код ошибки F2

На машинках без табло светится третий индикатор

Пожалуйста, попал в такую ситуацию. Пришел на вызов высвечивается ошибка F2, понимаю, что это связано с термистором, то есть датчиком температуры воды, сделал замеры, при комнатной температуре сопротивление терморезистора 13 кОм. Когда беру в руку, сопротивление изменяется, но не так сильно как хотелось. Подскажите пожалуйста, какое должно быть сопротивление датчика температуры для стиральной машине Атлант. Есть подозрение, что его тупо поменяли и поставили с другой стиральной машины, так как клемма с проводами, по всей видимости мененная, потому что провода скреплены на скрутке, к тем проводам, которые идут на этот датчик

Сразу хочу сказать, что термистор очень редко выходит из строя, но бывает и такое. Сопротивление датчика температуры на стиральной машине Атлант равно 5 кОм, при комнатной температуре. Вообще, в своей практике терморезистор, я менял всего два или три раза. Короче, если не поможет надо смотреть периферию на модуле управления

Код ошибки F4

Или мигание 2-го индикатора

Почему Стиральная машина не сливает воду. Почистил всё что можно, снял и проверил помпу, вычистил патрубок, который идет от бака к корпусу помпы, открутил фильтр и там всё прочистил, продул шланг слива воды. Короче говоря, чего только ни делал, но всё равно светится 3 и 4 индикатор на панели управления и действительно вода с бака очень плохо сливается, а иногда вообще не сливается. Относил модуль управления в мастерскую, мастер сказал, что с ним всё в порядке и мол надо смотреть саму стиралку. Как быть?

А помпу не пытались поменять? Дело в том что, это такая запчасть, которую так просто не проверишь. Очень часто бывает, что подключаешь к ней 220 и она исключительно работает, но когда ставишь её на место, она начинает глючить. Это хорошо, что вы все патрубки продули и помыли, теперь можно говорить, о том что надо менять помпу. Ещё на прессостате может формироваться сигнал полный бак, это происходит в результате того, что на датчики уровня воды залипают контакты в данном положение и так как мозги видят, что бак полный, они прекращают откачку воды

Код ошибки F3

В стиральной машине без дисплея горит 3-ий или 4-ый светодиод

Светится 3-ий и 4-ый индикатор на панели управления. Понятно, что поломка связано с тэном, но при его проверке, он оказался целый, что еще надо проверить

Ребята, это основная поломка в любой стиральной машине, тут не всё так просто, как вам кажется на первый взгляд. Это общая ошибка, которые сигнализируют в большей степени, что у стиральной машины идёт утечка электричества на корпус или пробой какой-либо цепи. В первую очередь проверять надо тэн и двигатель, но проверять не на пробой и на обрыв, а на утечку. Как это сделать вы можете посмотреть видео

Смотреть видео, как правильно проверить тэн и двигатель в стиральной машине

На стиральной машине без табло, горит 2 и 4 индикатор. Этот код ошибки указывает на то, что стиральная машина не успела набрать воду за определенный промежуток времени. Многие сразу гешат на клапан залива воды, но не всегда это так, даже можно сказать больше, в 90% случаях, проблема не в клапане, а в чём-то другом. Подробнее о том, почему СМА не заливает воду, вы можете узнать перейдя по этой ссылке. Напоминаю, что практически у всех стиральных машин, данная неисправность лечится почти одинаковоКод ошибки F5

Код ошибки F6

Если нет электронного дисплея то горят 2-ой и 3-ий диод. В этом случае желательно вызвать мастера, который сможет продиагностировать модуль управления и двигатель. В первую очередь надо проверить щетки, тахометр, ротор и статор двигатели и только потом модуль управления. Вполне возможно что на модуле вышло из строя реле реверса. Напоминая, этот ремонт должен делать квалифицированный мастер

Код ошибки F7

Для стиралок без табло — будут гореть 2-ой, 3-ий и 4-ый индикатор. Опять-таки, нужен специалист который разбирается в электрике. Этот код говорит о том, что из сети поступает, либо пониженное, либо повышенное напряжение. В общем надо замерить ток в розетке, и на выходе из сетевого фильтра

Код ошибки F8

Если нет дисплея светится 1-ый индикатор. Указывает на, то что уровень воды, в стиральной машине превышает норму, то есть вода долго набирается. Все сразу спешат проверить прессостат, но я вас уверяю, что в большинстве случаев, виновник этому не датчик уровня воды, а какая-либо другая деталь. Про эту неисправность стиральной машине, лучше прочитать в этой статье, так как это общая ошибка для всех стиралок и исправляется она, практически везде одинаково

 

Код ошибки F9

Светится 1 и 4 диод. В большинстве случаев надо проверять таходатчик на двигателе стиральной машины. Также бывает выход из строя модуля управления, но это должен смотреть мастер. Хотя в видео выше, есть информация, об этой неисправности

Код ошибки F10

Или свечение 1 и 3 индикатора. Тоже самое что и «door». В общем надо проверять замок блокировки люка, провода которые подходят к нему и всю остальную цепь, в том числе и модуль управления

Код ошибки F12

Или мигание 1, 2 и 4 диода. Указывает на поломку двигателя, также может быть неисправна цепь двигателя на модуле управления. В любом случае надо вызывать мастера, дело в том, что проверить двигатель очень трудно, конечно можно посмотреть на искрение щеток или проверить обмотки, в обрыве они или нет, также можно посмотреть на выработку щёток, но как закон, после такой проверки, всё равно хозяин вызывает мастера

Код ошибки F13

Или мерцание 1, 2 и 4 индикатора. Честно говоря для меня непонятно, для чего вообще этот код внесли в программу диагностики стиральной машины Атлант. Эта ошибка, вообще ни на что не указывает, то есть надо проверять всё, что можно. Молодцы белорусы — справились — называется догадайся мол сама, что мы имели в виду

Код ошибки F14

Или свечение 1 и 2 индикатора. В данном случае требуется ремонт модуля управления, тут можно утверждать, что на все 100% своими руками, произвести ремонт не получится

Код ошибки F15

Редчайшая поломка, встречаются только в тех стиралках, на которых стоит защита от утечки воды, но иногда высвечивается и тогда, когда идет самослив. На машинках без дисплея, этого кода я не встречал

В окончании хочу сказать, что ремонт стиральной машины Атлант своими руками, вполне возможен, несмотря на бытующее мнение, о сложности этой стиральной машины. Как по мне, так основная сложность лишь в том, что модуль управления не всегда показывает ту ошибку, которая есть на самом деле

Коды ошибок стиральных машин Атлант самостоятельная диагностика

Ошибка «Sel» или отсутствует свечение всех индикаторов	Проблемы с селектором программ	Проверяется работоспособность самого селектора; Проводится проверка контроллера.
Ошибка «None» или свечение всех индикаторов	Слишком много пены в барабане	Неправильно выбрана программа – следует более корректно выбрать программу для того или иного типа ткани; Требуется корректировка дозы стирального порошка или выбор другой марки моющего средства.
Ошибка «F2» или свечение третьего светодиода	Поломка температурного датчика	Производится проверка работоспособности датчика и контроль целостности электрических цепей; Производится замена датчика и проверка управляющего модуля.
Ошибка «F3» или свечение 3-го и 4-го индикаторов	Поломка ТЭНа	Производится контроль целостности ТЭНа, проверяются электрические цепи; Требуется проверить работоспособность управляющего модуля.
Ошибка «F4» или свечение 2-го индикатора	Неисправность сливной помпы	Проверяется проходимость сливной системы; Производится удаление посторонних предметов из насоса; Проверяется и прочищается фильтр; Производится проверка управляющего модуля и электрических цепей.
Ошибка «F5» или свечение 2-го и 4-го индикаторов	Неисправность заливного клапана	Проверяется проходимость впускной системы, производится чистка сетчатого фильтра; Производится контроль давления воды, проверяется кран; Проверяется работоспособность электромагнитного клапана и его токоведущих цепей; Проверяется работоспособность управляющего модуля.
Ошибка «F6» или свечение 2-го и 3-го индикаторов	Поломка реле реверса	Производится проверка и замена реле; Требуется проверка работоспособности двигателя.
Ошибка «F7» или свечение 2-го, 3-го и 4-го индикаторов	Неверные параметры питающей сети	Проверяется и заменяется фильтр помех; Проверяется работоспособность управляющего модуля; Проверяются параметры питающей сети.
Ошибка «F8» или свечение 1-го индикатора	Перенаполнение бака	Проверяется прессостат и его электрические цепи; Производится проверка управляющего модуля; Проверяется герметичность баллона; Требуется проверка впускного клапана (возможно, его заклинили в открытом состоянии).
Ошибка «F9»или свечение 1-го и 4-го индикаторов	Поломка тахогенератора	Следует проверить тахогенератор и двигатель; Производится проверка управляющего модуля и электрических цепей.
Ошибка «F10» или свечение 1-го и 3-го индикатора	Неисправна блокировка загрузочного люка. В таком случае стиральная машинка не будет включаться.	Проверяется работа электронного замка и его электрических цепей; Проверяется электронный модуль.
Ошибка «door» или свечение 1-го, 3-го и 4-го индикаторов	Неисправность замка люка	Требуется проверка положения загрузочного люка и плотность его закрытия; Проверяется работа электронного замка и его электрических цепей; Проверяется электронный модуль.
Ошибка «F12» или свечение 1-го и 2-го индикаторов	Поломка двигателя	Следует проверить двигатель и его обмотки, неисправный двигатель подвергается замене; Проверяются управляющий модуль и электрические цепи.
Ошибка «F13» или свечение 1-го, 2-го и 4-го индикаторов	Прочие поломки	Производится проверка всех электрических цепей и модулей.
Ошибка «F14» или свечение 1-го и 2-го индикаторов	Сбой в ПО	Требуется замена электронного модуля.
Ошибка «F15»	Обнаружена протечка	Проверяется целостность манжеты загрузочного люка; Проверяется целостность сливной системы; Проверяется целостность бака.

Коды ошибок стиральных машин автоматов АТЛАНТ

В основном код ошибки не определяет точную поломку детали, а показывает только причину неправильной работы стиральной машинки. Точную поломку сможет назвать только мастер после осмотра техники. В случае возникновения поломки и невозможности самостоятельно её починить обращайтесь к нам. Стиральные машины Атлант с дисплеем на передней панели при возникновении неисправностей отображают следующие коды ошибок:

Ремонт автоматических стиральных машин дело непростое, требует навыков, знаний и квалификации, поэтому, если Вы понимаете, что Вам будет трудно выполнить самостоятельный ремонт стиральной машины, то обратитесь в мастерскую «ЛевшаСервис» по телефонам, указанным на http://levshaservis.deal.by.

P.S. Если Вы все таки задумали расковырять аппарат и не справились, то будьте готовы к тому, что мастера возьмут с вас за ремонт значительно большую сумму…

Сигнализация об ошибке	Расшифровка	Варианты неисправностей	Ремонт
На машинке с дисплеем«Sel». На машинке без дисплея: индикаторы не светятся	Поломка селектора интерфейсного модуля	Возможна поломка потэнциометра, который выбирает программы.	Смена интерфейсного модуля.
На дисплее: «None». Если нет дисплея, светятся все индикаторы.	Чрезмерное образование пены.	Слишком много порошка использовано для стирки.	Ограничить количество стирального порошка более маленьким.
		Задан ошибочный режим. То есть, режим с чрезмерным количеством залитой воды.	Подбирать режим стирки, который предназначен для данного типа ткани.
		Использован стиральный порошок или другое моющее средство не подходящее для машинной стирки.	Применять только те средства и порошки, которые предназначаются для стирки машиной автомат.
Дисплей: «F2»Светится третий диод.	Вышел из строя температурный датчик	Проблемы с проводкой и контактами датчика температуры или модуля.	Убедиться в том, что провода и контакты исправны.
		Испортился температурный датчик.	Поменять нагревательный элемент (ТЭН).
		Вышел из строя управляющий модуль.	Сменить неисправный модуль.
Дисплей: «F3»Светятся 3-й и 4-й индикаторы.	Вышел из строя нагревательный элемент стиральной машины (ТЭН)	Поломка нагревательного элемента.	Замена нагревательного элемента (ТЭНа).
		Нарушение контактов или проводки.	Убедиться в исправности проводов и контактов.
		Вышел из строя управляющий модуль.	Нужно произвести замену модуля.
На дисплее:«F4»Светиться 2-ой диод	Поломка сливной помпы (насоса)	Забился или пережат сливной шланг.	Распрямить шланг, найти и устранить засор.
		Некорректная установка шланга.	Переустановить шланг так, как того требует инструкция.
		Попадание постороннего предмета в помпу – застопоривание ее крыльчатки.	Удалить попавший предмет, проверить вращение крыльчатки.
		Поломка сливной помпы.	Сменить сломанную помпу.
		Запал шар в сливной муфте.	Произвести слив воды из машинки при помощи трубки и поменять муфту
		Произошел засор сливной муфты.	Выполнить чистку.
		Проблема с проводкой и контактами.	Убедиться в исправности того и другого.
		Вышел из строя модуль электроники.	Поменять модуль электроники.
Дисплей: «F5»2-ой и 4-ый индикаторы светятся	Поломка заливного клапана	Забит фильтр шланга залива воды.	Чистка фильтра.
		Забит или пережат заливной шланг.	Открутить шланг от машинки. Пустить воду для проверки. При необходимости провести чистку шланга.
		Нет воды в водопроводе, не открыта подача воды в кране или поломка заливного клапана.	Убедиться, что кран находится в открытом положении. Убедиться, что в водопроводе не отключена вода. При необходимости провести смену клапана.
		Обрыв в цепи между управляющим модулем и заливным клапаном.	При помощи тестера убедиться в наличии или отсутствии обрыва.
		Нарушение контактов заливного клапана	Убедиться в том, что контакты в рабочем состоянии.
		Поломка управляющего модуля.	Заменить его на новый.
Дисплей: «F6»2-ой и 3-ий индикатор светится	Проблемы с реле электромотора стиральной машины	Перегрев статорной обмотки. Контакты, отвечающие за температурную защиту движка, разъединены.	Произвести смену движка машины.
Дисплей: «F7»Светятся: 2-ой, 3-ий и 4-ый индикаторы	Проблемы с электричеством	Поломка фильтра помех	Его необходимо поменять.
		Напряжение в сети не соответствует необходимой (больше или меньше).	Провести проверку сети при помощи тестера.
		Поломался управляющий модуль.	Провести его замену.
Дисплей:«F8»Светиться индикатор № 1	Слишком много воды в баке стиральной машины	Поломка прессостата.	Заменить прессостат.
		Застопорился заливной клапан.	Произвести замену клапана.
		Проблемы с проводкой или контактами прессостата и управляющего модуля.	Убедиться в том, что провода и контакты исправны.
		Нарушение герметичности баллона.	Провести проверку баллона.
		Сломался управляющий модуль.	Поменять его на исправный.
Дисплей:«F9»Светятся индикаторы №1 и №4	Проблемы с тахометром движка	Нарушение контакта или проводки электромотора или управляющего модуля.	Убедиться в наличии или отсутствии неполадки, проверив провода и контакты.
		Сломался движок либо тахогенератор.	Произвести смену двигателя.
		Вышел из строя управляющий модуль.	Сменить его на исправный.
На дисплее: «F10» Если машинка без дисплея: святятся индикторы №1 и №3	Поломка УБЛ (блокировки)	Неисправность в блокировке.	Поменять ее на новую.
		Поломка управляющего модуля.	Замена.
Сообщение на дисплее:«door»Святятся 1-й, 3-й, 4-й индикаторы	Возможна поломка замка (УБЛ)	Нет контакта в блокировке .	Убедиться, что провода подключены правильно и обрывов нет.
		Не достаточно плотно заперт люк.	Запереть люк снова.
		Перекосилась дверца или замок.	Выправить люк / замок.
		Обрыв в цепи меж управляющим модулем и УБЛ.	Использовать тестер для проведения проверки цепи.
		Проблема с разъемом блокировки .	Убедиться в правильном подключении и целостности проводов.
		Вышел из строя управляющий модуль.	Поменять его.
Дисплей: «F12»1-й и 2-й индикаторы светятся	Возможна поломка триата движка	Сломался двигатель машинки.	Провести замену .
		Обрыв в моторной обмотке.	Провести замену движка.
		Нет контакта.	Убедиться в исправности проводов и разъема.
		Сломался управляющий модуль.	Поменять его.
Дисплей «F13»1-й, 2-ой, 4-ый индикаторы светятся	Разнообразные поломки	Проблемы с проводкой или контактами.	Провести проверку проводов и контактов.
		Поломался управляющий модуль.	Поменять на новый.
На дисплее: «F14»1-й и 2-й индикаторы	Сбой в программе	Произошел сбой программы. Некорректно программирован модуль электроники.	Провести замену модуля.
Дисплей: «F15»	Зафиксирована протечка воды	Разгерметизировался бак.	Провести его замену.
		Течь через закрытую дверь	Поменять манжету люка.
		Нарушение герметизации сливного шланга, патрубков, сливной муфте	Попытаться определить место протечки и устранить его. Удостовериться, что хомуты достаточно хорошо фиксируют патрубки. Убедиться в целостности патрубков и сливного шланга.

Коды ошибок стиральной машины Атлант

Чтобы узнать код ошибки стиральной машины Атлант нужно перейти в сервисный режим.

Как перейти в сервисный режим?

1. Установить программатор положение «0».
2. Зажать и держать кнопку «СТАРТ».
3. Поворачивать ручку по часовой стрелке до тех пор пока не услышите “ЗВУКОВОГО СИГНАЛА“.
4. Отпустить кнопку «СТАРТ».
5. Начать вращать ручку против часовой стрелки да до появления “ЗВУКОВОГО СИГНАЛА“.
6. Выполнив эти действия последовательно машинка  запустить режим “САМО ДИАГНОСТИКА” .

Расшифровка кодов:

Sel – не горят индикаторы. Это свидетельствует о выходе из строя селектора модуля интерфейса;

None – горят все индикаторы одновременно. Свидетельствует об избытке пены в воде;

F2 — загорелся третий индикатор слева. В неисправном состоянии находится датчик воды;

F3 — загорелись третий и четвертый индикаторы слева. Свидетельствует о поломке ТЭНа;

F4 — загорелся второй индикатор слева. Проблемы со сливом воды;

F5 — горят второй и четвертый индикаторы слева. Проблемы с забором воды;

F6 — горят второй и третий индикаторы слева. Реле электродвигателя находится в неисправном состоянии;

F7 — загорелись второй, третий и четвертый индикаторы. Проблемы с входными цепями питания;

F8 — горит первый индикатор слева. Свидетельствует о переливе воды;

F9 — загорелись первый и четвертый индикаторы. Таходатчик мотора вышел из строя;

F10, door — горят первый, третий и четвертый индикаторы. Проблемы с УБЛ;

F12 — загорелись первый и второй индикаторы слева. Свидетельствует о выходе из строя симистора управления двигателя;

F13 — горят первый, второй и четвертый индикаторы слева. Отсутствие сигнала, проблемы с модулем управления;

F14 — загорелись первый и второй индикаторы. Выход из строя программного обеспечения;

F15 — свидетельствует об утечке воды.

THERMADOR Код ошибки F2 – Как исправить? by subzerorepairnewyork.com Atlanta, NY 14808

код ошибки	Примечание	Ремонт проверки
F0	внутренняя логическая ошибка; отменить ключевой контроль. Звучит сигнал тревоги и выполняется сброс в режим без приготовления	Замените электронный регулятор плиты (также называемый часами или ERC)
F1	Внутренняя логическая ошибка (функция контроля).Подает звуковой сигнал и блокирует режимы приготовления	Замените электронный регулятор диапазона (также называемый часами или ERC)
F2	Обнаружен разгон температуры (выпечка/жарка: 600–700 F; очистка: 930–1000 градусов F). Звучит сигнал тревоги и сбрасывается в режим без приготовления. Проверьте плату реле на наличие залипших контактов. Проверьте датчик температуры духовки на нормальное сопротивление при комнатной температуре (1085-1097 Ом при 75 градусах по Фаренгейту). Проверьте разъемы проводки датчика на наличие ослабленного соединения или соединения с высоким сопротивлением. Проверьте функции электронного управления диапазоном (также называемого часами или ERC)	При необходимости замените релейную плату. Замените датчик температуры духовки, если другие компоненты в норме. Если неисправность повторяется, замените электронный регулятор диапазона (также называемый часами или ERC)
F3	Обнаружен обрыв цепи; датчик температуры духовки. Проверьте датчик на нормальное сопротивление комнатной температуре (1085-1097 Ом при 75 градусах по Фаренгейту). Проверьте провода и соединения между электронным регулятором диапазона (также называемым часами или ERC) и датчиком температуры духовки	Замените датчик, если другие компоненты в норме.Замените электронный регулятор диапазона (также называемый часами или ERC), если код неисправности повторяется
F4	Обнаружено короткое замыкание; датчик температуры духовки. Проверьте датчик на нормальное сопротивление комнатной температуре (1085-1097 Ом при 75 градусах по Фаренгейту). Проверьте провода между электронным регулятором диапазона (также называемым часами или ERC) и датчиком.	Замените датчик, если другие компоненты в норме. Замените электронное управление диапазоном (также называемое часами или ERC), если код неисправности повторяется
F7	Короткое замыкание функциональной клавиши более 16 секунд.Проверьте, что что-то нажимает на клавишу или мешает нормальному отпусканию клавиши	Замените электронный регулятор диапазона (также называемый часами или ERC), если другие компоненты проверяют нормально
F8	Внутренняя логическая ошибка; калибровка. Звучит сигнал тревоги и сбрасывается в режим без приготовления. Проверьте датчик температуры духовки на нормальное сопротивление при комнатной температуре (1085-1097 Ом при 75 F). Проверьте провода и соединения между электронным регулятором диапазона (также называемым часами или ERC) и датчиком температуры духовки	Замените электронный регулятор диапазона (также называемым часами или ERC) и датчиком температуры духовки, если другие компоненты проверяются нормально
F9	Внутренняя логика болезнь; контроль дверных замков. Звучит сигнал тревоги и сбрасывается в режим без приготовления. Если дверца заблокирована из-за чистой температуры, отключите питание до тех пор, пока дверь не будет разблокирована.	Замените электронный регулятор диапазона (также называемый часами или ERC)
Fd	Релейные приводы выпечки и жарки активны одновременно. Проверьте релейную плату на наличие повреждений: проследите E6 к K2 и K3 и сгоревшие контакты K3 и K3	Замените электронный регулятор диапазона (также называемый часами или ERC). При необходимости замените релейную плату
Пустой дисплей	Нет питания для электронного управления диапазоном (также называемого часами или ERC).Проверьте индикаторы духового шкафа и циферблата варочной панели (питание от L2 и L1 соответственно). Проверьте первичную обмотку трансформатора платы реле, от E1 до E2 (обычно 140 Ом). Если внутренний предохранитель трансформатора все еще исправен, проверьте выходные напряжения на контактах 9–8 (3,2 В переменного тока) и 7–6 (21 В переменного тока). Проверьте функции часов после замены платы реле	Если трансформатор платы реле разомкнут (от E1 до E2), замените плату реле. Если функции часов по-прежнему отсутствуют, замените электронный контроль диапазона (также называемый часами или ERC)

Five Frames from the Atlanta Botanical Garden 2020 — John Osterhout

Я все еще работаю над фотографиями из моей поездки в Атланту в январе 2020 года.Эта партия из Ботанического сада Атланты. Это была моя вторая поездка в Ботанический сад. Первый был в январе 2019 года. Когда-нибудь я хочу вернуться в Сад весной, когда Сад будет цвести.

Нарцисс

Я любитель нарциссов. Они были у меня во дворе, когда я жил в Новой Англии целую жизнь назад. Этот прятался в группе, растущей в горшке возле тропы. День был пасмурный и моросящий, поэтому яркий свет исходил от ручной вспышки.

Листья

Я заметил эти листья, живущие в горшке рядом с горшком с нарциссами. Они красочные. Я понятия не имею, что это за растение, поэтому я не знаю, осенние ли это цвета или они растут, как сейчас, круглый год. Если вы знаете, пожалуйста, напишите мне, и я обновлю пост. Я думаю, что они красивы, и этого достаточно для меня.

Богиня Земли

Я уже упоминал Богиню Земли в посте «Пять кадров пинхол-фотографий из ботанического сада Атланты».Вот она снова. Богиня Земли живет в Каскадном саду, имеет высоту 25 футов и может быть покрыта цветами. Когда она одета, ее украшают 18 000 цветов. Однако в январе она голая. Я хочу вернуться в Атланту и увидеть ее одетой!

Ступени и поручни

Мне понравились все нежные цвета в этом снимке. Эти шаги вели вниз к соединительному пути. День был совершенно пасмурный, и свет был особенно ровным.

Листья II

Эти листья красивые.’Достаточно.

---

Бонусные рамки

Отверстие в крышке Kended Canopy Walk

Это крохотная фотография Канопи-Уок Кендеда рядом с тем местом, где она пересекается с Азалией-Уок. Я думаю, что это лучший пример использования пинхол-фотографии, чем примеры, которые я показал в одном из моих предыдущих постов «Пять кадров пинхол-фотографий из ботанического сада Атланты». Здесь вы можете увидеть потусторонний/таинственный/светящийся/таинственный/призрачный вид, которого можно добиться с помощью пинхол-фотографии.

Низ живота Кендэды

Это снимок Канопи-Уок Кендеда снизу. Он был сделан рядом с узким отверстием, которое я показал чуть выше.

---

Все эти фотографии были сделаны на Canon 6DII. «Нарцисс» и «Листья» были сняты с помощью объектива Canon 100mm f2.0 и удлинительных трубок Kenko. «Богиня Земли» также была снята с объективом Canon 100mm f2.0, но без удлинительных трубок. «Ступени и рельсы», «Листья II» и «Под животом Кендэды» были сняты на Canon 24-70mm f2.8, а снимок «Keneda Canopy Walk Pinhole» был сделан с помощью Thingyfy Pinhole Pro X. Все фотографии были обработаны из файлов RAW с помощью Darktable, бесплатного программного обеспечения для Windoze, Mac и Linux.

Petron, F2 остаются непобедимыми и намерены возобновить соперничество

Sta. Lucia, наконец, преодолела пятиматчевый занос, развернув Foton, 13-25, 25-21, 25-23, 25-22, на Гран-при Филиппинской Суперлиги во вторник в Filoil Flying V Centre.

Кейси Шонляйн нанесла сокрушительные удары в третьем и четвертом сетах и ​​привела Леди Риелторс ко второй победе.Шенлейн набрала 13 очков, в то время как ее партнерша Молли Ломан набрала 12 очков для леди-риелторов, которые впервые со дня открытия 16 февраля отступили на победную дорожку.

Кейси Шенлейн из Sta. Лючия Риэлторс выступает против Селиме Ильясоглу и Майки Ортис из Foton. Ernie Sarmiento/ESPN5

Местные жители также выступили за Sta. Лючия в роли Пэм Ластимосы набрала девять очков в дополнение к 12 ударам и семи отличным приемам, в то время как Джо Марагинот нанес девять ударов и 15 приемов в хорошо сбалансированном наступательном нападении.

«Мне это нравится, потому что они играли более расслабленно. Им понравилось играть на корте, чего мы не добились в наших предыдущих играх. Я очень доволен», — сказал Ста. Наставница Лючии Бэйбс Кастильо.

“С тех пор проблема заключается в том, как мы закончим. Теперь, я думаю, это хороший опыт для них, они узнают, как закончить игру, они узнают, как играть в напряженных ситуациях.”

2019 PSL Grand Prix Insore

	60
	6	0
F2	5	1	5	1
Cignal	4	2
2
UVC	4	4	3
PLDT	3	3
STA.Lucia	2	5
Generika	1	1	6
Foton	1	6
6
По состоянию на время 10:00 70238

0 После вялого первого сета леди-риэлторы собрались вместе в последующих сетах, где они вступили в битву с Торнадо лицом к лицу.

The Lady Realtors отыгрались от дефицита 19-21 в четвертом сете, когда Аманда Вильянуэва нанесла кросс-корт и подала туз, обеспечив разворот 22-22.

Шенляйн наносила подряд шипы в матч-пойнте, 24-21, прежде чем Селиме Ильясоглу совершила решающую ошибку в атаке, обеспечив победу Леди Риелторс.

«Мне нравится, как мы играли. Надеюсь, мы сможем перенести это во второй раунд», — сказал Кастильо.

У Кортни Фелински было 23 убийства, четыре эйса и блок-шот за 28 очков, в то время как Ильясоглу и Элейн Касилаг набрали 15 и 9 очков соответственно за двукратного чемпиона Фотона, который потерпел пятое поражение в шести играх.

Калей Мау из United VC выступает против Петрона. Ernie Sarmiento/ESPN5

Тем временем действующий чемпион Petron одержал свою пятую победу подряд, отправив United VC на землю со счетом 25-12, 25-16, 25-20.

Стефани Нимер и Кэт Белл, отметившие свое 26-летие, блестяще выступили, набрав 18 и 17 очков, соответственно, за Blaze Spikers, которые набрали обороты перед тем, как в этот четверг столкнуться с непримиримым соперником F2 Logistics.

Импорт Яасмин Бедарт-Гани набрала 13 очков, в то время как американка филиппинского происхождения Калей Мау нанесла 11 попаданий, в том числе 14 отличных приемов и девять ударов, за УВК, которая потерпела третье поражение в шести играх.

Линдсей Сталцер из F2 Logistics выступает против Канджаны Кутайсонг и Ксении Кочигит из Дженерика-Аяла. Ernie Sarmiento/ESPN5

В ночное время Cargo Movers проиграли свой первый сет против Generika-Ayala, но быстро восстановили порядок, одержав победу 21-25, 25-19, 25-22, 25-16 и не отставая от Blaze. Спайкеры на вершине турнирной таблицы.

Линдси Сталцер лидировала в F2 Logistics с 26 очками, а Аби Марано добавил 14 очков. Life Savers опустились до 0-6.

220D-F2 из Rubus ulmifolius Убивает планктонные клетки Streptococcus pneumoniae и пневмококковые биопленки

PLoS One.2014; 9(5): e97314.

, ¹ , ¹ , ² , ¹ , ^{2 , 3} и ^{1 , *}

Шармила Дж.

Талекар

¹ Хьюберт Департамент глобального здравоохранения, Школа общественного здравоохранения им. Роллинза, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

Сопио Чочуа

¹ Хьюберт Департамент глобального здравоохранения, Школа общественного здравоохранения им. Роллинза, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

Кэти Нельсон

² Центр изучения здоровья человека, Колледж искусств и наук Эмори, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

Кит П.Клугман

¹ Хьюберт Департамент глобального здравоохранения, Школа общественного здравоохранения им. Роллинза, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

Кассандра Л. Куэйв

² Центр изучения здоровья человека, Колледж искусств и наук Эмори, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

³ Кафедра дерматологии, Медицинский факультет, Университет Эмори, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

Хорхе Э.

Видаль

¹ Хьюберт Департамент глобального здравоохранения, Школа общественного здравоохранения им. Роллинза, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

Гуннар Ф.Кауфманн, редактор

¹ Хьюберт Департамент глобального здравоохранения, Школа общественного здравоохранения им. Роллинза, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

² Центр изучения здоровья человека, Колледж искусств и наук Эмори, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

³ Кафедра дерматологии, Медицинский факультет, Университет Эмори, Атланта, Джорджия, Соединенные Штаты Америки,

Научно-исследовательский институт Скриппса и Sorrento Therapeutics, Inc., Соединенные Штаты Америки,

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Придумал и спроектировал эксперименты: SJT SC KPK CQ JEV. Проведены эксперименты: SJT SC JEV. Проанализированы данные: SJT CQ JEV. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: КН КПК. Написал статью: SJT JEV.

Поступила в редакцию 22 ноября 2013 г.; Принято 17 апреля 2014 г.

Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии надлежащего указания оригинального автора и источника.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Аннотация

Streptococcus pneumoniae (пневмококк) образует организованные биопленки, которые сохраняются в носоглотке человека. Эта стойкость позволяет пневмококку вызывать тяжелые заболевания, такие как пневмония, средний отит, бактериемия и менингит, которые ежегодно убивают почти миллион детей. В то время как бактериемия и менингит опосредованы планктонными пневмококками, биопленочные структуры присутствуют при пневмонии и среднем отите.Глобальное появление штаммов S. pneumoniae , устойчивых к наиболее часто назначаемым антибиотикам, требует дальнейшего открытия альтернативных терапевтических средств. В настоящем исследовании оценивали противомикробный потенциал растительного экстракта 220D-F2, богатого эллаговой кислотой и производными эллаговой кислоты, в отношении планктонных клеток S. pneumoniae и биопленочных структур. Наши исследования впервые показали, что при инокуляции вместе с планктонными культурами 220D-F2 дозозависимо ингибировал образование пневмококковых биопленок.Согласно измерению количества бактерий и анализа жизнеспособности бактерий LIVE/DEAD, 100 и 200 мкг/мл 220D-F2 обладали значительной бактерицидной активностью против планктонных культур пневмококков уже через 3 часа после инокуляции. Количественные значения МИК, полученные с помощью количественной ПЦР или разбавления и посева, показали, что 80 мкг/мл 220D-F2 полностью уничтожали ночные культуры планктонных пневмококков, включая штаммы, устойчивые к антибиотикам. Когда предварительно сформированные пневмококковые биопленки подвергались заражению 220D-F2, это значительно уменьшало популяцию биопленок через 3 часа после инокуляции.Минимальная ингибирующая концентрация биопленки (MBIC) ₅₀ была получена путем инкубации биопленок со 100 мкг/мл 220D-F2 в течение 3 и 6 часов инкубации. 220D-F2 также значительно уменьшал популяцию пневмококковых биопленок, образующихся на клетках глотки человека. Наши результаты демонстрируют потенциальное терапевтическое применение 220D-F2 как для уничтожения планктонных пневмококковых клеток, так и для разрушения пневмококковых биопленок.

Введение

Streptococcus pneumoniae (пневмококк) является важным патогеном человека, связанным с высокой заболеваемостью и смертностью [1].Глобальное бремя пневмококковой инфекции особенно велико у детей, пациентов с ослабленным иммунитетом и пожилых людей, вызывающих тяжелые заболевания, такие как пневмония, средний отит, бактериемия и менингит [2]–[4]. Пневмококк ежегодно вызывает 15 миллионов случаев серьезных заболеваний [1], [5] и 1,6 миллиона смертей, в том числе около 1 миллиона детей в возрасте до 5 лет [6]. В США пневмококк является причиной более 6 миллионов случаев среднего отита, примерно 500 000 случаев пневмонии, примерно 50 000 случаев бактериемии и примерно 3 000 случаев менингита.Только у пожилых людей ежегодная стоимость пневмококковых заболеваний для правительства США составляет почти 5,5 миллиардов долларов [7].

Колонизация носоглотки человека, происходящая в раннем детстве, и персистенция в этой нише являются предпосылками пневмококковой инфекции [4], [8]. Пневмококк месяцами сохраняется в носоглотке, образуя специализированные структуры, называемые биопленками [9], [10]. Биопленки представляют собой структурированные сообщества бактериальных клеток, заключенных в полимерную матрицу собственного производства, состоящую из полисахаридов, белков и нуклеиновых кислот, которая прилипает к инертным или живым поверхностям [11]. По сравнению со своими планктонными аналогами (10 ⁸ КОЕ/мл) биопленочные бактерии достигают гораздо более высокой плотности (10 ¹¹ КОЕ/мл), что может влиять на фармакодинамику антибиотиков [12]. Пневмококки, встроенные в эти биопленки, могут мигрировать в другие анатомические участки, вызывая тяжелые заболевания, связанные с биопленками, такие как пневмония и средний отит [13]–[15]. Из легких больных пневмококковой пневмонией или полости уха при развитии среднего отита планктонные пневмококки могут диспергироваться из структуры биопленки и проникать в стерильные участки, такие как кровоток или головной мозг, вызывая летальную бактериемию или менингит соответственно [16]–[ 18].

Было подсчитано, что около 60% бактериальных инфекций и до 80% хронических инфекций опосредуются организмами, продуцирующими биопленки [19]–[21]. Помимо пневмококковой пневмонии и среднего отита, другие инфекционные заболевания, в которых участвуют биопленки, включают зубной налет, гингивит, эндокардит, инфекции опорно-двигательного аппарата и инфекции мочевыводящих путей [22], хронические раны [23], покрытие контактных линз [24]. Инфекции, связанные с биопленкой, приводят к более длительному пребыванию в больнице, рецидивирующим инфекциям и увеличению смертности при наиболее резистентных инфекциях [19], [25]–[30].Более того, клетки, ассоциированные с биопленками, в 10 ² –10 ³ раз менее чувствительны к антибиотикам, чем их планктонные аналоги [26], [31]–[33].

С появлением клонов с множественной лекарственной устойчивостью наблюдается рост устойчивости к антибиотикам у штаммов S. pneumoniae [34]. В то время как внутренние механизмы антибиотикорезистентности планктонных пневмококков тщательно изучены [35, 36], специфический механизм, с помощью которого пневмококковые биопленки повышают резистентность к антибиотикам, находится в стадии активного изучения.Исследование Garcia-Castillo et al. (2007) демонстрирует, что биопленки, образованные штаммами S. pneumoniae , выделенными от больных муковисцидозом, обладают значительно более высокой устойчивостью к пенициллину, тетрациклину и рифампицину, чем те же штаммы, выращенные как планктонные пневмококки [37]. Повышенная резистентность клеток биопленки по сравнению с планктонными культурами также отмечена к амоксициллину, эритромицину, клиндамицину и левофлоксацину [38], а также к цефазолину и ванкомицину [39].Более поздние исследования in vivo Marks et al (2012) с использованием модели персистенции на мышах показали, что пневмококковые биопленки, сформированные на ткани носоглотки, более устойчивы к гентамицину и пенициллину G, чем пневмококки, диспергированные из структуры биопленки [40]. ].

Натуральные продукты и родственные структуры все чаще становятся основными источниками новых фармацевтических препаратов из-за огромного разнообразия функционально значимых вторичных метаболитов. Наши предыдущие исследования обнаружили, что экстракт растения Rubus ulmifolius Schott., Rosaceae (ежевика эльмлистная) продемонстрировали антимикробную активность (в диапазоне от 50 до 200 мкг/мл неочищенного экстракта) против штаммов Staphylococcus aureus без повреждения клеток млекопитающих человека [41]. Сложные исследования с использованием LC-UV/MS/MS (жидкостная хроматография-ультрафиолетовая абсорбционная тандемная масс-спектрометрия) показали, что экстракт, далее именуемый 220D-F2, содержал эллаговую кислоту (EA) и несколько производных эллаговой кислоты (EAD) или родственные сапогенину вещества. соединения. 220D-F2 смог ограничить образование биопленок, образованных устойчивым к метициллину S.aureus (MRSA), принадлежащих к разным линиям (например, USA100, USA200 и т. д.). Тестируемые штаммы включали внебольничный, глобальный эпидемический штамм и штамм MRSA USA300 [41]. Штаммы MRSA обладают устойчивостью ко всем пенициллинам и другим β-лактамным противомикробным препаратам и вызывают тяжелые заболевания человека, такие как инфекции кожи и мягких тканей (ИКМТ), эндоваскулярные инфекции, пневмония, септический артрит, эндокардит, остеомиелит, инфекции инородных тел и сепсис. 41]–[43]. Наши предыдущие эксперименты также демонстрируют терапевтический потенциал 220D-F2, поскольку он снижает количество стафилококковых биопленок, образующихся на катетерах 90–113 in vitro 90–114, и обеспечивает более значительное снижение количества биопленок при инкубации с антибиотиками, такими как даптомицин или клиндамицин [41].

Целью настоящего исследования была оценка антибактериального действия 220D-F2 в отношении планктонных пневмококков и пневмококковых ранних и зрелых биопленок. Здесь мы демонстрируем, что 220D-F2 убивает планктонные пневмококки и, следовательно, ограничивает образование структур биопленки. 220D-F2 также был способен уничтожать ранние и зрелые биопленки и биопленки, сформированные на клетках глотки человека. Вместе наши исследования подчеркивают потенциальное профилактическое и терапевтическое применение 220D-F2 против пневмококковых заболеваний, затрагивающих либо планктонные клетки (т.е. бактериемия и менингит) или заболевания, связанные с биопленкой, такие как средний отит и пневмония.

Материалы и методы

Бактериальный штамм и условия культивирования

Штаммы, использованные в этом исследовании, были секвенированы эталонным геномом S. pneumoniae штамм D39 [44] (номер доступа GenBank {“type”:”entrez-нуклеотид”,” attrs”:{“текст”:”NC_008533″,”term_id”:”13831″,”term_text”:”NC_008533″}}NC_008533), TIGR4 [45] и SPJV01. D39 — вирулентный инкапсулированный штамм 2 типа [46], TIGR4 — другой инвазивный изолят, относящийся к вакцинному серотипу 4, а SPJV01 — производное D39, экспрессирующее зеленый флуоресцентный белок (GFP) [47]. S. pneumoniae штамм GA58771 устойчив к амоксициллину, цефуроксиму, клиндамицину, эритромицину, пенициллину и тетрациклину. Штаммы TN33388 [48] и 7828–04 устойчивы к хлорамфениколу, эритромицину и промежуточно устойчивы к линезолиду [49]. Штаммы S. pneumoniae культивировали на чашках с триптиказо-соевым агаром с 5% овечьей крови (BAP), бульоном Мюллера-Хинтона (MH) или бульоном Тодда-Хьюитта, содержащим 0,5% (вес/объем) дрожжевого экстракта (THY).

Приготовление экстракта 220D-F2

220D-F2 готовили, как описано ранее [41].Вкратце, ваучерные образцы растения были депонированы в Гербарии Университета Эмори (GEO), а объемные образцы корней были высушены, измельчены в мелкий порошок и экстрагированы 95% этанолом. Растительный материал удаляли с помощью вакуумной фильтрации, а растворитель удаляли с помощью роторного испарителя и лиофилизации. Полученный экстракт ресуспендировали в воде и подвергали последовательному распределению в гексане, этилацетате и бутаноле с помощью делительной воронки. Бутаноловую фракцию сушили, а затем дополнительно разделяли с использованием гравитационной колонки с градиентом метанола и дихлорметана (активную фракцию 220D-F2 собирали при 40∶60 MeOH:CH ₂ Cl ₂ ).

220D-F2 Проверка контроля качества

Все партии 220D-F2 были подвергнуты высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с целью контроля качества от партии к партии с использованием системы Agilent 1260 Infinity с насосами с четвертичным градиентом, встроенным дегазатором , автоматический пробоотборник, нагреватель колонки, детектор с диодной матрицей и система сбора данных (OpenLab CDS ChemStation, Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США). Использовали колонку Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 Analytical 4,6×250 мм, 5 микрон при температуре 40°C.Экстракт растворяли в 5% ДМСО в H ₂ O и ввод 20 мкг элюировали со скоростью потока 1 мл/мин, используя градиент 2 систем растворителей: (A) 0,1% муравьиная кислота в H ₂ О; (B): 0,1% муравьиной кислоты в ACN. Подвижная фаза составляла 98% А в момент времени 0,88% в 34 мин. с 16 мин. удержание, 75% через 70 мин. 5% на 82 мин. с 16 мин. удержание с последующим удержанием на уровне 98% в течение 15 мин. Хроматограммы сравнивали с хроматограммами исходных образцов, чтобы убедиться в наличии основных пиков перед использованием в биоанализе [41].Партии 220D-F2, проверенные на качество, суспендировали в ДМСО (исходный раствор 20 мг/мл или 50 мг/мл), стерильно фильтровали (0,2 мкм) и хранили в стерильных флаконах при -80°C перед использованием во всех биоанализах.

Приготовление инокулята для заражения планктонных клеток и для анализа биопленки

Ночную культуру BAP штаммов S. pneumoniae использовали для приготовления клеточной суспензии в бульоне THY до оптической плотности при 600 нм (OD ₆₀₀ ) 0,05 и инкубировали при 37°C в атмосфере 5% CO ₂ до тех пор, пока культура не достигала ОП ₆₀₀ , равной 0.2 (ранняя логарифмическая фаза). Аликвоту (∼7×10 ⁵ КОЕ/мл) инокулировали в двух повторах либо на 8-луночном предметном стекле (Lab-Tek, Rochester, NY), либо в полистироловом 24-луночном титрационном микропланшете (Costar, Corning, NY). содержащих бульон THY, и инкубировали при 37°C с 5% CO ₂ в течение указанного времени.

Противомикробное действие 220D-F2 на планктонные клетки

Для изучения действия 220D-F2 на планктонные клетки штаммы инокулировали в бульоне THY, в 24-луночные полистироловые микротитрационные планшеты и немедленно обрабатывали либо ДМСО, либо двумя различными концентрациями. 220D-F2 (100 мкг/мл и 200 мкг/мл).Обработанные бактерии инкубировали статически при 37°C в атмосфере 5% CO ₂ в течение 3 ч и КОЕ/мл планктонных клеток или биопленок, производных от планктонных клеток, получали следующим образом: планктонные клетки осторожно удаляли, серийно разводили в фосфатно-солевом буфере. (PBS, pH = 7,4) и высевали на BAP для получения КОЕ/мл. После полного удаления планктонных клеток, содержащих надосадочную жидкость, биопленки осторожно промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) для удаления несвязавшихся бактерий, добавляли 1 мл стерильного PBS, а затем тщательно соскабливали биопленки, включая края лунок. Суспензии биопленок серийно разбавляли в PBS и высевали на BAP для получения числа жизнеспособных биопленок (КОЕ/мл). Колонии подсчитывали с использованием счетчика колоний Bantex 920A (American Bantex Corporation, Burlingame, CA).

Оценка жизнеспособности планктонных клеток с помощью флуоресцентного метода

Набор для определения жизнеспособности бактерий LIVE/DEAD BacLight L7012 (Invitrogen-Molecular Probes) использовали для дальнейшей визуализации жизнеспособности планктонных клеток, зараженных различными концентрациями 220D-F2.Флуоресцентные красители, включенные в набор, встраиваются или не встраиваются в бактериальные клетки в зависимости от целостности мембраны и, следовательно, жизнеспособности. Процедуру окрашивания и концентрации красителей использовали в соответствии с рекомендациями производителя. Препараты наблюдали и фотографировали с использованием инвертированного микроскопа Evos fl (Advanced Microscopy Group).

Антимикробное действие 220D-F2 на предварительно сформированные пневмококковые биопленки

Для изучения антибактериального действия 220D-F2 на ранние и зрелые биопленки (преформированные биопленки) штаммы инокулировали в бульоне THY и инкубировали в течение 3 или 8 часов. Затем культуральную среду полностью удаляли, а к биопленкам добавляли свежий бульон THY. Эти предварительно сформированные биопленки обрабатывали ДМСО или 220D-F2 (100 мкг/мл или 200 мкг/мл) и инкубировали в течение дополнительных 3, 6 или 12 ч при 37°C в атмосфере 5% CO ₂ . Затем подсчитывали количество биопленок, как описано выше. Минимальную концентрацию, ингибирующую биопленки (MBIC), рассчитывали как концентрацию экстракта, при которой биопленки были уничтожены (т.е. уничтожены и/или диспергированы) до уровня ≥90% для MBIC ₉₀ или ≥50% для MBIC ₅₀ . по сравнению с контрольными лунками, обработанными только ДМСО.

Флуоресцентные изображения биопленок пневмококков, обработанных 220D-F2

Для получения флуоресцентных изображений биопленок, обработанных экстрактом 220D-F2, SPJV01 (экспрессирующий gfp под контролем мальтозного промотора) [50] инокулировали в бульон THY с добавлением с 2% мальтозой и немедленно обрабатывали либо ДМСО, либо различными концентрациями 220D-F2. Эти культуры инкубировали статически при 37°C в атмосфере 5% CO ₂ в течение 8 часов. Затем планктонные клетки удаляли, а клетки биопленки промывали PBS и фиксировали 4% параформальдегидом в течение ночи.Клетки блокировали 2% бычьим сывороточным альбумином (БСА) в течение 1 ч и окрашивали в течение 1 ч при комнатной температуре в темноте поликлональным антителом против S. pneumoniae , связанным с изотиоцианатом флуоресцеина (FITC; ViroStat, Портленд, Мэн). ). Препараты один раз промывали PBS, заключали в монтажную среду Vectashield (Vector Laboratories, Burlingame, CA) и анализировали с помощью конфокального микроскопа Zeiss LSM 510. Конфокальные изображения анализировали с помощью LSM Image Browser, версия 4.02.121. В другом наборе экспериментов предварительно сформированные биопленки (8 часов) обрабатывали, как указано выше, в течение 3, 6 или 12 часов.Поскольку продукция GFP гасится через 8–10 ч после инокуляции [47], препараты биопленок окрашивали DAPI (100 нМ) [4′,6-диамидино-2-фенилиндол] в течение 5 мин при комнатной температуре, а изображения фотографировали с помощью перевернутой фотокамеры. Микроскоп Evos fl (Advanced Microscopy Group).

Культуры клеток

Клетки Detroit 562 из глотки человека (ATCC CCL-198) регулярно культивировали в минимальной основной среде (MEM 1X) (Gibco, Гранд-Айленд, Нью-Йорк) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, не инактивированной нагреванием ( FBS) (Atlanta Biologicals, Flowery Branch, GA), 1% заменимых аминокислот (Sigma, St.Louis, Миссури), 1% глютамин (Sigma, Сент-Луис, Миссури), пенициллин (100 ЕД/мл) и стрептомицин (100 мкг/мл). Клетки обычно собирали с 0,25% трипсином (Gibco, Grand Island, NY), ресуспендировали в среде для культивирования клеток и инкубировали при 37°C во влажной атмосфере с 5% CO ₂ .

Биореактор (biBio) с живыми культурами на клетках носоглотки человека

Подготовку клеточных культур для экспериментов в биореакторе (далее biBio) проводили в основном так, как недавно описано [51], [52].Клетки глотки человека, установленные в biBio, инокулировали аликвотой, содержащей ~7×10 ⁵ КОЕ/мл штамма S. pneumoniae D39, и немедленно перфузировали стерильной средой MEM с низкой скоростью потока (0,20 мл/мин). , с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, не инактивированной нагреванием, и забуференной 1% HEPES (10 мМ) (Gibco, Гранд-Айленд, Нью-Йорк). Биопленкам давали возможность сформироваться в течение 8 часов и обрабатывали ДМСО или различными концентрациями 220D-F2 (200, 400 или 800 мкг/мл) в течение дополнительных 12 часов.Для уничтожения пневмококков в biBio требовались более высокие дозы 220D-F2. Затем биопленки собирали в стерильном PBS. Супернатант, сходящий с апикальной стороны biBio и содержащий планктонные клетки, также собирали после обработки 220D-F2. Как биопленки, так и планктонные клетки серийно разбавляли в PBS и высевали на BAP для получения количества жизнеспособных клеток (КОЕ/мл). Каждая концентрация тестировалась дважды (технические повторы), и эксперименты проводились в два разных дня.

Количественная минимальная ингибирующая концентрация (qMIC)

Был использован модифицированный количественный подход MIC (qMIC), поскольку физический аспект (т. е. цвет, текстура и т. д.) 220D-F2 мешали классическим показаниям микрофона. qMIC был основан на рекомендациях Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) по микроразведению бульона [53]. Вкратце, ночную культуру штаммов использовали для приготовления суспензии в физиологическом растворе, которая была доведена до стандарта мутности 0,5 по МакФарланду. Аликвоту (100 мкл) этой бактериальной суспензии добавляли к 11 мл бульона THY или бульона Мюллера-Хинтона с поправкой на катионы (CAMHB) с 2–5% лизированной лошадиной крови (LHB) в соответствии с рекомендациями CLSI и использовали для серийных анализов. разбавьте экстракт 220D-F2 в 96-луночном планшете (Costar, Corning, NY) для получения конечной концентрации 20, 40, 80, 160 или 320 мкг/мл.Были включены отрицательный контроль (THY или CAMHB с LHB), экспериментальный контроль (бактериальная суспензия с ДМСО) и положительный контроль (бактериальная суспензия). Обработанные бактериальные суспензии инкубировали при 37°C в атмосфере 5% CO ₂ для THY или при 35°C на окружающем воздухе для CAMHB с LHB в течение от 20 до 24 часов.

Для количественного определения количества жизнеспособных пневмококковых клеток после инкубации с 220D-F2 мы использовали молекулярный подход с использованием количественных реакций (к)ПЦР следующим образом: ДНК экстрагировали из 100 мкл бактериальной суспензии, обработанной 100 мкл буфера ТЕ. содержащий 0.04 мкг/мл лизоцима и 75 ЕД/мл мутанолизина с использованием автоматизированного прибора BioMerieux NucliSENS easyMAG 2.0.1 (BioMerieux, Durham, NC). Экстрагированную ДНК (1 мкл) использовали в качестве матрицы в реакциях количественной ПЦР (25 мкл), нацеленных на ген lyt A [54]. Эти реакции содержали 1X Invitrogen Platinum Quantitative PCR SuperMix-UDG, 200 нм каждого праймера (прямой-5′-ACGCAATCTAGCAGATGAAGCA-3′ и обратный-5′-TCGTGCGTTTTAATTCCAGCT-3′) и 200 нм зонда (5′-FAM- GCCGAAAACGCTTGATACAGGGAG –3′ –BHQ1) и воду для молекулярной биологии.Дублированные реакции проводили в термоциклере системы реального времени CFX96 (Bio-Rad, Hercules, CA) со следующими параметрами циклирования: начальная денатурация при 95°C в течение 2 мин, затем 40 циклов денатурации при 95°C в течение 15 мин. сек и отжиг и удлинение при 60°С в течение 1 мин. Для получения молекулярных КОЕ/мл очищенную геномную ДНК из эталонного штамма S. pneumoniae TIGR4 серийно разбавляли для приготовления стандартов, представляющих 2,14×10 ¹ , 4,29×10 ¹ , 4,29×10 ² , 4.29×10 ³ , 4,29×10 ⁴ или 4,29×10 ⁵ копий генома. Строили стандартную кривую и рассчитывали КОЕ/мл (D39 [44] и TIGR4 [45] кодируют только одну копию гена lyt A) с помощью программного обеспечения Bio-Rad CFX manager. Эксперименты qMIC повторялись трижды в разные дни. Эффективность этих исследований количественной ПЦР всегда составляла примерно 95–99%.

Количественная МИК путем разбавления и посева

Эталонный штамм D39 и штамм GA 58771 с множественной лекарственной устойчивостью были выбраны для количественных исследований МИК путем разбавления и посева.По существу, штаммы получали и обрабатывали различными концентрациями 220D-F2, как указано выше. В конце периода инкубации бактерии серийно разбавляли и высевали на BAP для получения количества жизнеспособных бактерий (КОЕ/мл). Опыты включали техническую повторность и проводились не менее трех раз.

Экстракция ДНК из штаммов

S. pneumoniae

Штаммы выращивали в течение ночи на чашках с кровяным агаром. Бактериальные суспензии готовили из 200 мкл стерильного PBS и ДНК, выделенной из промытых осадков, с помощью набора QIAamp Mini (Qiagen) в соответствии с инструкциями производителя.Окончательную элюцию проводили в 100 мкл стерильной воды для ДНК, и препараты ДНК хранили при -80°C до использования.

Статистический анализ

Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения Microsoft Excel (корпорация Microsoft). Различия между средними значениями рассчитывали по критерию t Стьюдента, при этом значение p менее 0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

220D-F2 ингибирует образование пневмококковых биопленок

Мы и другие ранее продемонстрировали, что биопленки, созданные инвазивным S. pneumoniae штамм D39 полностью формируются через 8-10 ч после инокуляции. Мы также демонстрируем, что D39 и SPJV01, изогенное производное D39, производят больше биомассы биопленки, чем штаммы TIGR4 или штамм R6 [47]. Чтобы начать изучение ингибирующего действия 220D-F2 на эти структуры, мы инокулировали SPJV01 увеличивающимися количествами 220D-F2 и инкубировали обработанные бактерии в течение 8 часов. Поскольку этот экстракт растворяли в ДМСО, для контрольных лунок, включенных вместе со штаммом D39, использовали тот же объем ДМСО (мкл), что и для каждой из тестируемых концентраций 220D-F2.Наши результаты демонстрируют дозозависимое ингибирование образования пневмококковых биопленок, обработанных 220D-F2, но ДМСО не оказывал явного ингибирующего действия на образование биопленок (не показано). Микрофотографии конфокальной микроскопии биопленок, образованных при инкубации с ДМСО, показывают нормальную структуру (т.е. плотные зоны бактериальных скоплений), тогда как структуры, сформированные в присутствии 220D-F2, показывают дозозависимое уменьшение прикрепленных бактерий ().

Ингибирование пневмококковых биопленок с помощью 220D-F2.

SPJV01 инокулировали в 96-луночные планшеты, содержащие THY, и обрабатывали ДМСО или указанной концентрацией 220D-F2. Обработанные культуры инкубировали 8 ч при 37°С. Микрофотографии флуоресцентных биопленок получали методом конфокальной микроскопии. Масштабная линейка, показанная на нижней левой панели, действительна для всех панелей. Показан представитель пяти независимых экспериментов.

220D-F2 ингибирует образование пневмококковых биопленок путем уничтожения планктонных клеток

Поскольку в приведенном выше эксперименте одновременно инокулировали 220D-F2 и планктонные клетки, чтобы выяснить, было ли ингибирование образования биопленки вызвано уничтожением планктонных клеток, жизнеспособность планктонные культуры оценивали путем разбавления и посева.По сравнению с контролем, обработанным ДМСО, планктонные культуры, обработанные либо 100 мкг/мл, либо 200 мкг/мл 220D-F2, показали значительное снижение жизнеспособности бактерий. Флуоресцентные микрофотографии планктонных пневмококков, обработанных 220D-F2 и окрашенных с помощью анализа LIVE/DEAD, подтвердили наличие пневмококков с разрушенными мембранами (). Как и ожидалось, поскольку количество планктонных клеток уменьшилось, наши исследования показали, что количество биопленок также уменьшилось по сравнению с количеством биопленок в контрольных лунках, обработанных ДМСО (14).В совокупности эти результаты показывают, что 220D-F2 убивает планктонные культуры S. pneumoniae штамма D39 уже через 3 часа после инокуляции, тем самым уменьшая популяцию пневмококков, образующих структуру биопленки.

Уничтожение планктонных пневмококков 220D-F2.

S. pneumoniae , штамм D39, инокулировали в 24-луночные планшеты, содержащие THY, и обрабатывали ДМСО или указанной концентрацией 220D-F2; обработанные культуры инкубировали 3 ч при 37°С.Планктонные клетки удаляли (А), затем биопленки промывали и удаляли (Б). Обе популяции разводили и высевали на BAP для получения КОЕ/мл. Столбики погрешностей представляют собой стандартную ошибку среднего значения, рассчитанного с использованием данных двух независимых экспериментов, обработанных в двух экземплярах. Статистическую значимость ( p ≤0,05) рассчитывали с использованием непараметрического одностороннего критерия Стьюдента t (*). C) Планктонные пневмококки, обработанные в течение 3 часов, также окрашивали с помощью анализа LIVE/DEAD и визуализировали с помощью флуоресцентного микроскопа.Панели показывают слияние зеленого и красного каналов. Белые стрелки указывают на мертвые пневмококки. Масштабная линейка действительна для всех панелей.

Ингибирующее действие экстракта 220D-F2 на биопленки

Затем мы оценили потенциал 220D-F2 как ингибитора ранних и зрелых пневмококковых биопленок, образуемых штаммом D39 [47].

Ранние биопленочные структуры обрабатывали возрастающими количествами экстракта 220D-F2, а затем инкубировали в течение 3 или 6 часов. Мы также обработали структуры зрелой биопленки 220D-F2 в течение дополнительных 12 часов. Предварительно сформированные биопленки, полученные через 3 часа после инокуляции, а затем дополнительно обработанные 220D-F2 в течение 3 часов, показали значительное снижение биомассы биопленки (1). Точно так же предварительно сформированные биопленки, полученные через 3 часа после инокуляции, а затем обработанные в течение дополнительных 6 часов, показали значительное уменьшение количества биопленок (1). Количество биопленок было получено аналогичным образом при использовании 100 мкг/мл или 200 мкг/мл 220D-F2. Рассчитанная минимальная ингибирующая концентрация биопленки (MBIC) показала, что обработка ранних биопленок в течение 3 или 6 часов 100 или 200 мкг/мл 220D-F2 приводила к получению MBIC ₅₀ .Аналогичным образом зрелые биопленки подвергали воздействию 100 и 200 мкг/мл 220D-F2. В соответствии с дозозависимым эффектом, зрелые пневмококковые биопленки, обработанные в течение 3 часов 100 мкг/мл 220D-F2, не показали значительного уменьшения количества клеток биопленки (), тогда как обработка в течение 6 или 12 часов тем же количеством вызывала значительное снижение количества биопленок (). Рассчитанный MBIC предварительно сформированных зрелых биопленок, обработанных в течение 3, 6 или 12 часов 100 и 200 мкг/мл 220D-F2, дал MBIC ₅₀ или MBIC ₉₀ соответственно.В целом, наши результаты показывают, что 220D-F2 вызывает значительное сокращение предварительно сформированных клеток биопленки.

Уничтожение ранних пневмококковых биопленок с помощью 220D-F2.

S. pneumoniae D39 инкубировали в течение 3 ч при 37°С, после чего ранние биопленки промывали и добавляли свежий THY, содержащий указанную концентрацию 220D-F2 или ДМСО. Обработанные биопленки инкубировали в течение (A) 3 или (B) 6 ч при 37°C, а затем промывали, разбавляли и высевали на BAP для получения КОЕ/мл. Столбики погрешностей представляют собой стандартную ошибку среднего значения, рассчитанного с использованием данных двух независимых экспериментов; каждый эксперимент был обработан в двух повторностях.Статистическую значимость ( p ≤0,05) рассчитывали с использованием непараметрического одностороннего критерия Стьюдента t (*).

Уничтожение зрелых пневмококковых биопленок с помощью 220D-F2.

S. pneumoniae D39 инокулировали и инкубировали в течение 8 ч при 37°C, после чего зрелые биопленки промывали и добавляли свежий THY, содержащий указанную концентрацию 220D-F2 или ДМСО. Обработанные биопленки инкубировали в течение (A) 3, (B) 6 или (C) 12 ч при 37°C, а затем промывали, разбавляли и высевали на BAP для получения КОЕ/мл.Столбики погрешностей представляют собой стандартную ошибку среднего значения, рассчитанного с использованием данных двух независимых экспериментов; каждый эксперимент был обработан в двух повторностях. Статистическую значимость ( p ≤0,05) рассчитывали с использованием непараметрического одностороннего критерия Стьюдента t (*).

Для дальнейшего изучения того, была ли структура биопленки, обработанной 220D-F2, диспергированной, т. е. отделенной от субстрата, биопленки окрашивали с помощью флуоресценции. Флуоресцентные микрофотографии зрелых биопленок, обработанных в течение 3, 6 или 12 часов 50 мкг/мл 220D-F2, выявили умеренное отслоение структуры биопленки. Однако при инкубации с концентрацией 100 или 200 мкг/мл в течение 12 ч биопленки почти полностью отделялись от субстрата (1).

Микрофотографии 220D-F2, инкубированного со зрелыми пневмококковыми биопленками.

S. pneumoniae D39 инокулировали и инкубировали в течение 8 ч при 37°C, после чего биопленки промывали и добавляли свежий THY, содержащий указанную концентрацию 220D-F2 или ДМСО. Эти обработанные зрелые биопленки инкубировали в течение 3, 6 или 12 часов и после промывки структуру биопленки окрашивали DAPI (100 нМ).Окрашенные биопленки визуализировали с помощью флуоресценции. Показанная линейка масштаба также действительна для всех панелей.

220D-F2 убивает пневмококковые биопленки и планктонные клетки, образующиеся на клетках глотки человека . biBio имитирует среду носоглотки, поскольку имеет человеческие клетки глотки и непрерывный поток питательных веществ.

С.pneumoniae в biBio затем инкубировали с различными количествами 220D-F2 и оценивали жизнеспособность биопленок и планктонных клеток путем разбавления и посева. В то время как 200 или 400 мкг/мл не изменили биомассу биопленки (), инкубация biBio с 800 мкг/мл 220D-F2 в течение 12 часов значительно уменьшила количество пневмококковых биопленок (MBIC ₅₀ ) (). При той же концентрации количество планктонных клеток также значительно уменьшилось (MBIC ₉₀ ).

Таблица 1

Обработка S.pneumoniae D39, выращенный в системе biBio на клетках глотки человека.

1 800 мкг / мл ^*

S.pneumoniae	КОЕ/мл
Планктонные клетки
DMSO	5.72 × 10 5 ± 3.70 × 10 5
220D-F2:	220D-F2:
200 мкг / мл	2,02 × 10 6 ± 8,43 ×10 5
400 мкг/мл	5. 23 × 10 6 ± 2.57 × 10 6
800 мкг / мл *	1.10 × 10 4 ± 9.80 × 10 3
Биопленки
DMSO	3.54 × 10 7 ± 1,53 × 10 7
220D-F2:	220D-F2:
200 мкг / мл	2,63 × 10 8 ± 7.24 ×10 7
400 мкг/мл	1. 12 × 10 8 ± 3.25 × 10 7
1.08 × 10 7 ± 3.93 × 10 6
± стандартная ошибка

Молекулярные исследования минимальной ингибирующей концентрации (МПК)

Наши результаты показывают, что 220D-F2 может иметь потенциальное терапевтическое применение против пневмококковых заболеваний. Поэтому затем мы исследовали минимальную ингибирующую концентрацию 220D-F2 с использованием протокола количественного (q) MIC.Этот модифицированный протокол включал молекулярную количественную оценку и подсчет бактерий клеток S. pneumoniae D39 (КОЕ/мл) после воздействия тестируемых разведений 220D-F2. В нашем молекулярном подходе использовался количественный анализ ПЦР, нацеленный на ген автолизина lyt A [54]. Планктонные клетки разводили до рекомендуемой плотности клеток и инкубировали с носителем (ДМСО) или серийными разведениями 220D-F2, начиная с 20 мкг/мл. По сравнению с необработанным контролем, обработка ДМСО, 20 или 40 мкг/мл 220F-D2 приводила к одинаковой плотности бактерий () при инкубации в THY или CAMHB с LHB.Напротив, обработка 80 мкг/мл () снижала жизнеспособность бактерий на четыре порядка, тогда как 160 или 320 мкг/мл снижали количество пневмококковых клеток до нижнего предела обнаружения нашего анализа (<100 КОЕ/мл), что указывает на то, что 220D -F2 убил почти, если не все, пневмококки. Аналогичное лечение эталонного штамма TIGR4 или трех других штаммов, устойчивых к антибиотикам, приводило к аналогичной эрадикации пневмококков (1). Разбавление и посев штаммов пневмококков, обработанных различными концентрациями 220D-F2, показало такое же количество бактерий, как и при использовании нашего молекулярного подхода (1).

Таблица 2

Бактерицидная активность 220D-F2 в отношении штаммов S. pneumoniae .

9069111 9067

Штамм/обработка	КОЕ/мл
Д39
необработанные	5.48 ± 3 8 ± 3.91 × 10 6
× 10 8 ± 2.91 × 10 7
220D-F2:
20 мкг/мл	1.61 × 10 8 ± 2.18 × 10 7
40 мкг / мл	3. 41 × 10 8 ± 5,91 × 10 7
80 мкг / мл	2,70 × 10 4 ± 1,40 × 10 4
160 мкг / мл	≤100 ± 0,00
320 мкг / мл	≤100 ± 0,00
ТИГР4
Необработанные	1,43 × 10 7 ± 2,59 × 10 6
2201- F2 (80 мкг / мл)	≤100 ± 0.00
ТН33388 *
необработанные	9. 58 × 10 7 ± 8.55 × 10 6
2201- F2 (80 мкг / мл)	≤100 ± 0,00
7828-04 *
необработанные	1.57 × 10 8 ± 3.66 × 10 7
2201-F2 (80 мкг / мл)	≤100 ± 0,00
GA58771 *
Необработанный	8.73 × 10 7 ± 1,13 × 10 7
2201-F2 (80 мкг / мл)	≤100 ± 0,00

2 Таблица 3

Бактерицидная активность 220D-F2 против Штаммы S. pneumoniae количественно определены культуральным методом.

9

6

Штамм / лечение	CFU / мл
D39
необработанные	3.54 × 10 8 ± 1,49 × 10 8
DMSO	1.00 × 10 8 ± 7.61 × 10 7
2201-F2 (80 мкг / мл)	<100 ± 0,00
GA58771 *
необработанные	6. 82 × 10 7 ± 2.95 × 10 7
DMSO	1.97 × 10 7 ± 1,37 × 10 7
220D-F2 (80 мкг / мл)	<100 ± ± 0,00

Обсуждение

Насколько нам известно, это первое сообщение об агенте с антибактериальной активностью в отношении S.pneumoniae планктонные клетки и пневмококковые биопленки, полученные из растительного продукта. 220D-F2 был способен убивать предварительно сформированные пневмококковые биопленки, уменьшая популяцию клеток биопленки через 6 или 12 часов после обработки 200 мкг/мл до ~10% или ~1% соответственно.

Наблюдался четкий дозозависимый эффект, позволяющий уничтожать и отделять предварительно сформированные пневмококковые биопленки. Полное отделение структуры биопленки от субстрата наблюдалось через 12 часов после обработки 200 мкг/мл (1), что хорошо коррелировало с количеством бактерий, показывающим снижение биомассы биопленки примерно на 99% (2). Более того, при использовании модели биопленки с клетками глотки человека обработка пневмококковых биопленок 800 мкг/мл 220D-F2 вызывала значительное снижение биомассы биопленки (11). Наблюдение, что для уничтожения 90 113 биопленок S. pneumoniae 90 114 в biBio с клетками глотки человека (800 мкг/мл) по сравнению со статической моделью (200 мкг/мл) требуется большее количество 220D-F2, может быть связано с комбинацией разные факторы. Например, biBio постоянно перфузируется с фиксированной скоростью (200 мкл/мин) средой для культивирования клеток, содержащей 220D-F2, что может отсрочить время воздействия активных молекул этого соединения на пневмококки [3].Неизвестные метаболиты, продуцируемые живыми культурами клеток глотки человека, подвергшихся воздействию пневмококков, также могут вызывать косвенное ингибирование 220D-F2. Существует также повышенная биомасса биопленки, когда эти пневмококковые биопленки выращиваются на клетках глотки человека, что может объяснить повышенную концентрацию 220D-F2, необходимую для уничтожения пневмококков в этой модели in vivo [40], [51].

Только несколько других молекул оказались эффективными против пневмококковых биопленок. В недавнем исследовании, проведенном Domenech et al (2011), было обнаружено уменьшение пневмококковых биопленок примерно на 80%, когда предварительно сформированные биопленки инкубировали с амидазой LytA, которая кодируется и продуцируется пневмококком и другими родственными стрептококками [55].Дисперсия около 70% пневмококковых биопленок была также достигнута при инкубации с 5-азацитидином (5-аза), аналогом пиримидинового нуклеозида цитидина [56]. В статье Trapetti et al (2009) показано, что ингибиторы нейраминидазы DANA (т. е. 2,3-дидегидро-2-дезокси-N-ацетилнейраминовая кислота), занамивир и осельтамивир ингибируют способность пневмококков образовывать биопленки, зависимые от сиаловой кислоты. 57]. В то время как активность 5-аза против других патогенов не исследовалась, LytA и ингибиторы нейраминидазы, по-видимому, специфичны для пневмококковых биопленок.Исследования в рамках этой работы добавили в этот список экстракт ботанического производного. Дополнительные преимущества 220D-F2 включают в себя то, что он также активен против биопленок, образованных устойчивыми к антибиотикам штаммами MRSA, и не вызывает явного повреждения различных in vitro культивируемых эукариотических клеток [т.е. клетки проксимальных канальцев почки человека (HK-2), клетки почек крысы (NRK-52E), клетки проксимальных канальцев почек мыши и гепатоциты мыши (AML12)] [41].

Отслоение биопленок в основном опосредовано снижением жизнеспособности бактерий, поскольку анализ LIVE/DEAD подтвердил разрушение мембран ().Планктонные пневмококки были почти полностью уничтожены 220D-F2, демонстрируя МИК 80 мкг/мл. Эти штаммы включали пневмококки с множественной лекарственной устойчивостью, а также другой эталонный штамм TIGR4. В отличие от других натуральных продуктов, которые были протестированы против планктонных пневмококков и S. aureus , [58]–[60] в этой работе мы демонстрируем, что активные молекулы 220D-F2 обладают потенциалом для лечения как заболеваний, связанных с биопленкой, так и пневмококковых заболеваний. при посредничестве планктонных организмов [т.е. пневмококки, растущие в жидких микросредах, таких как кровь или спинномозговая жидкость (ЦСЖ)].

220D-F2 содержит смесь эллаговой кислоты и производных эллаговой кислоты, а также другие второстепенные компоненты, которые еще предстоит определить [41]. В то время как некоторые из бактерицидных свойств 220D-F2 могут быть связаны с эллаговой кислотой и ее гликозидными производными, другие компоненты также могут играть важную роль в уничтожении планктонных пневмококков и пневмококковых биопленок. Текущие исследования сосредоточены на фракционировании и выделении отдельных компонентов, обнаруженных в 220D-F2, для выяснения структуры и тестирования активности.Мы предполагаем, что MIC и MBIC отдельных компонентов будут ниже, чем наблюдаемые в этом исследовании для 220D-F2.

В этой работе также было представлено использование молекулярных реакций, наряду с МИК, для количественного определения плотности бактерий после антимикробной провокации. Мы воспользовались количественными реакциями, которые использовались нашей группой и другими для молекулярного количественного определения пневмококковой нагрузки, и поэтому получили количественные, а не качественные МИК. Количество бактерий, полученное с использованием этих реакций, коррелировало с количеством КОЕ/мл, полученным путем разбавления и посева.Данные, представленные в и, показали резкое падение при инкубации планктонных пневмококков с концентрацией 80 мкг/мл. Таким образом, ∼10 ⁵ КОЕ/мл планктонных пневмококков, инокулированных в соответствии с рекомендациями CLSI, уничтожались 80 мкг/мл 220D-F2. Сообщалось об аналогичной пневмококковой нагрузке в легочной ткани больных пневмонией (≥10 ⁴ КОЕ/г) или в их выделениях (≥10 ⁵ КОЕ/мл) [61]. Эти данные подтверждают дальнейшее фракционирование 220D-F2 и тестирование против пневмококка и других патогенов.

Возможность того, что ингибиторы кПЦР, содержащиеся в экстракте, мешали нашим реакциям, была опровергнута, поскольку был добавлен другой набор контрольных реакций, ~400 мкг чистой ДНК S. pneumoniae в пробирки, содержащие пневмококки, обработанные 80 мкг/мл 220D- F2, и реакции обнаружили и количественно определили аналогичное количество этого контроля ДНК.

В заключение, эта работа представляет собой первое исследование по оценке бактерицидной активности экстракта 220D-F2 в отношении как S.pneumoniae планктонные клетки и пневмококковые биопленки. Антибактериальный потенциал отдельных компонентов этой композиции для лечения пневмококковой инфекции, вызванной штаммами с множественной лекарственной устойчивостью, такой как хронический средний отит, является многообещающим и заслуживающим внимания. Поскольку штаммы пневмококков, устойчивые к некоторым антибиотикам, появляются все чаще, открытие новых альтернатив, таких как активные молекулы, присутствующие в 220D-F2, может обеспечить терапевтические альтернативы для лечения пневмококковых заболеваний в будущем.

Благодарности

Авторы благодарят Магдери Клугман за ее исключительную поддержку в некоторых лабораторных процедурах. Также спасибо д-ру Фуминори Сакаи и д-ру Джошуа Шаку за критический вклад в ходе этого проекта и всем сотрудникам лабораторий Видала, Клугмана и Куэйва за предложения и обсуждения. Авторы также благодарят доктора Лесли МакГи из Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC) и докторов Дэвида Стивенса и доктора Скотта Чэнси из Медицинской школы Университета Эмори за предоставление S.pneumoniae устойчивые к антибиотикам штаммы.

Заявление о финансировании

У авторов нет поддержки или финансирования для отчета.

Каталожные номера

1. О’Брайен К.Л., Вольфсон Л.Дж., Ватт Дж.П., Хенкл Э., Делориа-Нолл М. и др. (2009) Бремя болезней, вызванных Streptococcus pneumoniae , у детей младше 5 лет: глобальные оценки. Ланцет 374: 893–902. [PubMed] [Google Scholar]3. Ян Ф., Сюй С.Г., Ян М.Дж., Чжан Ю.Ю., Клугман К.П. и др. (2008) Чувствительность к противомикробным препаратам и молекулярная эпидемиология Streptococcus pneumoniae , выделенных из Шанхая, Китай. Антимикробные агенты Int J 32: 386–391. [PubMed] [Google Scholar]4. ван дер Полл Т., Опал С.М. (2009)Патогенез, лечение и профилактика пневмококковой пневмонии. Ланцет 374: 1543–1556. [PubMed] [Google Scholar]6. Линч JP 3-й, Жанель Г.Г. (2010) Streptococcus pneumoniae : эпидемиология и факторы риска, эволюция устойчивости к противомикробным препаратам и влияние вакцин. Карр Опин Пульм Мед 16: 217–225. [PubMed] [Google Scholar]7. Weycker D, Strutton D, Edelsberg J, Sato R, Jackson LA (2010)Клиническое и экономическое бремя пневмококковой инфекции у пожилых людей в США.вакцина 28: 4955–4960. [PubMed] [Google Scholar]8. Kadioglu A, Weiser JN, Paton JC, Andrew PW (2008)Роль факторов вирулентности Streptococcus pneumoniae в респираторной колонизации и заболевании хозяина. Нат Рев Микробиол 6: 288–301. [PubMed] [Google Scholar]9. Simell B, Auranen K, Kayhty H, Goldblatt D, Dagan R, et al. (2012)Фундаментальная связь между пневмококковым носительством и заболеванием. Вакцины Expert Rev 11: 841–855. [PubMed] [Google Scholar] 10. Богарт Д., ван Белкум А., Слюйтер М., Луйендейк А., де Гроот Р. и соавт.(2004) Колонизация Streptococcus pneumoniae и Staphylococcus aureus у здоровых детей. Ланцет 363: 1871–1872 гг. [PubMed] [Google Scholar] 11. Костертон Дж. В. (1999) Введение в биопленку. Антимикробные агенты Int J 11: 217–221 обсуждение 237–219. [PubMed] [Google Scholar]

12. Thomas JG, Litton I, Rinde H (2006) Экономическое влияние биопленок на стоимость лечения. Биопленки, инфекция и антимикробная терапия , под редакцией Pace JL, Rupp ME и Finch RG (CRC Press.Тейлор и Фрэнсис, Бока-Ратон, Флорида): 21–37.

13. Холл-Студли Л., Ху Ф.З., Гизеке А., Нистико Л., Нгуен Д. и др. (2006) Прямое выявление бактериальных биопленок на слизистой оболочке среднего уха у детей с хроническим средним отитом. Джама 296: 202–211. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]14. Санчес С.Дж., Шившанкар П., Стол К., Трахтенбройт С., Саллам П.М. и др. (2010) Пневмококковый повторный белок, богатый серином, представляет собой внутривидовой бактериальный адгезин, который способствует агрегации бактерий in vivo и в биопленках. PLoS Патог 6: е1001044. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]15. Weimer KE, Armbruster CE, Джуно Р.А., Hong W, Pang B, et al. (2010)Коинфекция Haemophilus influenzae способствует образованию пневмококковой биопленки во время экспериментального среднего отита и препятствует прогрессированию пневмококковой инфекции. J заразить Dis 202: 1068–1075. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]16. Ash SY, Sheffield JV (2013) Пневмококк. Med Clin North Am 97: 647–666, x-xi. [В паблике] 17. Пичичеро М.Е. (2013)Средний отит.Педиатр Клин Норт Ам 60: 391–407. [PubMed] [Google Scholar] 18. Shak JR, Vidal JE, Klugman KP (2013)Влияние бактериальных взаимодействий на пневмококковую колонизацию носоглотки. Тенденции микробиол 21: 129–135. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]19. Costerton JW, Stewart PS, Greenberg EP (1999)Бактериальные биопленки: частая причина стойких инфекций. Наука 284: 1318–1322. [PubMed] [Google Scholar] 20. Парсек М.Р., Сингх П.К. (2003)Бактериальные биопленки: новая связь с патогенезом заболевания. Анну Рев Микробиол 57: 677–701. [PubMed] [Google Scholar] 21. Москосо М., Гарсия Э., Лопес Р. (2009) Пневмококковые биопленки. Интер микробиол 12: 77–85. [PubMed] [Google Scholar] 22. Марцинкевич Дж., Струс М., Пасич Э. (2013)Устойчивость к антибиотикам: «темная сторона» хронических инфекций, связанных с биопленкой. Пол Арк Мед Вэн 123: 309–313. [PubMed] [Google Scholar] 23. Davis SC, Ricotti C, Cazzaniga A, Welsh E, Eaglstein WH, et al. (2008)Микроскопические и физиологические доказательства колонизации раны, связанной с биопленкой, in vivo.Восстановление ран 16: 23–29. [PubMed] [Google Scholar] 24. Имамура Й., Чандра Дж., Мукерджи П.К., Латтиф А.А., Щотка-Флинн Л.Б. и соавт. (2008) Биопленки Fusarium и Candida albicans на мягких контактных линзах: разработка моделей, влияние типа линз и восприимчивость к растворам для ухода за линзами. Противомикробные агенты Chemother 52: 171–182. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]25. Донлан Р.М. (2001)Формирование биопленки: клинически значимый микробиологический процесс. Клин заразить Dis 33: 1387–1392.[PubMed] [Google Scholar] 26. Донлан Р.М., Костертон Дж.В. (2002)Биопленки: механизмы выживания клинически значимых микроорганизмов. Clin Microbiol Rev. 15: 167–193. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]27. Ramage G, Martinez JP, Lopez-Ribot JL (2006)Биопленки Candida на имплантированных биоматериалах: клинически значимая проблема. FEMS дрожжевой раствор 6: 979–986. [PubMed] [Google Scholar] 28. Костертон Дж. В., ДеМео П. (2011) Обсуждение. Роль биопленок: попадаем ли мы в цель? Пласт Реконстр Сург 127 Приложение 1 36С–37С.[PubMed] [Google Scholar] 29. Уолкотт Р., Дауд С. (2011) Роль биопленок: достигаем ли мы правильной цели? Пласт Реконстр Сург 127 Приложение 1 28С–35С. [PubMed] [Google Scholar] 30. Уолкотт Р.Д., Роудс Д.Д., Беннетт М.Е., Уолкотт Б.М., Гогохия Л. и др. … (2010) Хронические раны и парадигма медицинской биопленки. J Уход за ранами 19: 45–46, 48–50, 52–43. [В паблике] 31. Серка Н., Мартинс С., Серка Ф., Джефферсон К.К., Пьер Г. Б. и др. (2005)Сравнительная оценка чувствительности к антибиотикам коагулазонегативных стафилококков в биопленке по сравнению с планктонной культурой по данным подсчета бактерий или быстрой колориметрии XTT.J Антимикробный химиопрепарат 56: 331–336. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]32. Аарон С.Д., Феррис В., Рамотар К., Вандемхин К., Чан Ф. и др. (2002) Чувствительность планктонных, прикрепленных и выращенных на биопленке изолятов Pseudomonas aeruginosa к антибиотикам, культивированных из мокроты взрослых с муковисцидозом. Джей Клин Микробиол 40: 4172–4179. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]33. Ceri H, Olson ME, Stremick C, Read RR, Morck D, et al. (1999) The Calgary Biofilm Device: новая технология для быстрого определения чувствительности бактериальных биопленок к антибиотикам.Джей Клин Микробиол 37: 1771–1776. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]34. Song JH, Dagan R, Klugman KP, Fritzell B (2012)Взаимосвязь между пневмококковыми серотипами и устойчивостью к антибиотикам. вакцина 30: 2728–2737. [PubMed] [Google Scholar] 35. Song JH (2013) Успехи в борьбе с устойчивостью пневмококков к антибиотикам. Эксперт Респир Мед 7: 491–498. [PubMed] [Google Scholar] 36. Энрикес-Нормарк Б., Туоманен Э.И. (2013)Пневмококк: эпидемиология, микробиология и патогенез. Колд Спринг Харб Перспект Мед 3.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] 37. Гарсия-Кастильо М., Морозини М.И., Вальверде А., Альмарас Ф., Бакеро Ф. и др. (2007) Различия в развитии биопленки и чувствительности к антибиотикам среди изолятов Streptococcus pneumoniae из образцов муковисцидоза и культур крови. J Антимикробный химиопрепарат 59: 301–304. [PubMed] [Google Scholar] 38. дель Прадо Г., Руис В., Навес П., Родригес-Серрато В., Сориано Ф. и др. (2010)Формирование биопленки штаммами Streptococcus pneumoniae и эффектами человеческого сывороточного альбумина, ибупрофена, N-ацетил-l-цистеина, амоксициллина, эритромицина и левофлоксацина.Диагностика Microbiol Infect Dis 67: 311–318. [PubMed] [Google Scholar] 39. Санчес С.Дж., Кумар Н., Лискано А., Шившанкар П., Даннинг Хотопп Дж.С. и др. (2011) Streptococcus pneumoniae в биопленках не может вызывать инвазивное заболевание из-за измененной продукции детерминант вирулентности. PLoS один 6: e28738. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]40. Маркс Л.Р., Парамешваран Г.И., Хаканссон А.П. (2012)Взаимодействия пневмококков с эпителиальными клетками имеют решающее значение для оптимального формирования биопленки и колонизации in vitro и in vivo.Заразить иммунитет 80: 2744–2760. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]41. Quave CL, Estevez-Carmona M, Compadre CM, Hobby G, Hendrickson H, et al. (2012)Производные эллаговой кислоты из Rubus ulmifolius ингибируют образование биопленки Staphylococcus aureus и улучшают реакцию на антибиотики. PLoS один 7: e28737. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]42. Quave CL, Plano LR, Pantuso T, Bennett BC (2008)Влияние экстрактов итальянских лекарственных растений на рост планктона, образование биопленки и прилипание метициллин-резистентного Staphylococcus aureus . J Этнофармакол 118: 418–428. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]43. Дэвид М.З., Даум Р.С. (2010)Внебольничный устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus : эпидемиология и клинические последствия возникающей эпидемии. Clin Microbiol Rev. 23: 616–687. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]44. Lanie JA, Ng WL, Kazmierczak KM, Andrzejewski TM, Davidsen TM и соавт. (2007) Последовательность генома вирулентного штамма Эвери серотипа 2 D39 из Streptococcus pneumoniae и сравнение с таковым неинкапсулированного лабораторного штамма R6.J Бактериол 189: 38–51. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]45. Tettelin H, Nelson KE, Paulsen IT, Eisen JA, Read TD, et al. (2001) Полная последовательность генома вирулентного изолята Streptococcus pneumoniae . Наука 293: 498–506. [PubMed] [Google Scholar]46. Avery OT, Macleod CM, McCarty M (1944) Исследования химической природы вещества, вызывающего трансформацию пневмококковых типов: индукция трансформации фракцией дезоксирибонуклеиновой кислоты, выделенной из пневмококка типа III. J Эксперт Мед 79: 137–158. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]47. Vidal JE, Ludewick HP, Kunkel RM, Zahner D, Klugman KP (2011) LuxS-зависимая система восприятия кворума регулирует раннее образование биопленки штаммом Streptococcus pneumoniae D39. Заразить иммунитет 79: 4050–4060. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]48. Уолтер Н., Смит А.М., Фаррелл Д.Дж., Шаффнер В., Мур М. и др. (2005)Новый механизм устойчивости к оксазолидинонам, макролидам и хлорамфениколу рибосомного белка L4 пневмококка.Противомикробные агенты Chemother 49: 3554–3557. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]49. Донг В., Чочуа С., МакГи Л., Джексон Д., Клагман К.П. и др. (2014) Мутации в гене rplD нечувствительных к линезолиду штаммов Streptococcus pneumoniae , выделенных в США. Противомикробные агенты Chemother 58: 2459–2462. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]50. Nieto C, Espinosa M (2003)Конструирование мобилизуемой плазмиды pMV158GFP, производной pMV158, несущей ген, кодирующий зеленый флуоресцентный белок. Плазмида 49: 281–285. [PubMed] [Google Scholar]51. Vidal JE, Howery KE, Ludewick HP, Nava P, Klugman KP (2013)Системы кворума LuxS/аутоиндуктор 2 и Com регулируют биопленки Streptococcus pneumoniae в биореакторе с живыми культурами респираторных клеток человека. Заразить иммунитет 81: 1341–1353. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]52. Шак Дж. Р., Людевик Х. П., Ховери К. Е., Сакаи Ф., Йи Х. и др. (2013) Новая роль Streptococcus pneumoniae токсина пневмолизина в сборке биопленок.МБио 4: e00655–00613. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

53. CLSI (2009) Методы разбавления тестов на чувствительность к противомикробным препаратам для бактерий, которые растут в аэробных условиях. Утвержденный стандарт – восьмая редакция. М07 – А8. Уэйн, Пенсильвания, США: Институт клинических и лабораторных стандартов. Том. 29 №2.

54. Carvalho Mda G, Tondella ML, McCaustland K, Weidlich L, McGee L, et al. (2007)Оценка и усовершенствование ПЦР в реальном времени, нацеленных на гены lyt A, ply и psa A для обнаружения пневмококковой ДНК. Джей Клин Микробиол 45: 2460–2466. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]55. Domenech M, Garcia E, Moscoso M (2011)Разрушение биопленок Streptococcus pneumoniae in vitro с помощью бактериальных и фаговых пептидогликангидролаз. Противомикробные агенты Chemother 55: 4144–4148. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]56. Yadav MK, Chae SW, Song JJ (2012)Влияние 5-азацитидина на образование биопленки in vitro Streptococcus pneumoniae . Микроб Патог 53: 219–226. [PubMed] [Google Scholar]57.Траппетти С., Кадиоглу А., Картер М., Хейр Дж., Яннелли Ф. и др. (2009)Сиаловая кислота: предупреждаемый сигнал образования пневмококковой биопленки, колонизации и инвазии хозяина. J заразить Dis 199: 1497–1505. [PubMed] [Google Scholar]58. Zampini IC, Villena J, Salva S, Herrera M, Isla MI, et al. (2012) Потенциал стандартизированного экстракта и изолированных флавоноидов из Zuccagnia punctata для лечения респираторных инфекций Streptococcus pneumoniae : исследования in vitro и in vivo. J Этнофармакол 140: 287–292. [PubMed] [Google Scholar]59. Элаисси А., Руис З., Салем Н.А., Мабрук С., Бен Салем И. и др. (2012) Химический состав эфирных масел 8 видов эвкалипта и оценка их антибактериальной, противогрибковой и противовирусной активности. BMC Комплемент Альтерн Мед 12: 81. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]60. Шиу В.К., Малкинсон Дж.П., Рахман М.М., Карри Дж., Стэплтон П. и др. (2013) Новое антибактериальное средство растительного происхождения является ингибитором откачивающих насосов у Staphylococcus aureus .Противомикробные агенты Int J. [В паблике] 61. Baselski V, Klutts JS, Baselski V, Klutts JS (2013) Количественные культуры образцов, полученных при бронхоскопии, следует проводить для оптимального лечения вентилятор-ассоциированной пневмонии. Джей Клин Микробиол 51: 740–744. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

11 из 13, с. с 213 по 232

   Несколько правил включены из RFC 2396 [5], но обновлены до
   сделать их совместимыми с RFC 2234 [10].  К ним относятся:

      зарезервировано = ";" / "/" / "?" / ":" / "@" / "&" / "=" / "+"
                     / "$" / ","
      незарезервированный = буква / знак
      отметка = "-"/"_"/"."/"!"/"~"/"*"/"'"
                     / "(" / ")"
      escaped = "%"

   Значения полей заголовка SIP могут быть объединены в несколько строк, если
   строка продолжения начинается с пробела или горизонтальной табуляции. Все линейные
   пустое пространство, в том числе складное, имеет ту же семантику, что и SP. А
   получатель МОЖЕТ заменить любой линейный пробел одним SP до
   интерпретация значения поля или пересылка сообщения вниз по течению.
   Это должно вести себя точно так же, как HTTP/1.1, как описано в RFC.
   2616 [8].Конструкция SWS используется, когда линейное пустое пространство
   необязательно, обычно между токенами и разделителями.

      LWS = [*WSP CRLF] 1*WSP ; линейный пробел
      SWS = [LWS] ; сентябрь пробел

   Чтобы отделить имя заголовка от остальной части значения, используется двоеточие,
   который, в соответствии с приведенным выше правилом, допускает пробел перед, но не допускает строки
   разрыв и пробел после, включая разрыв строки.  ХКОЛОН
   определяет эту конструкцию.

      HCOLON = *(SP/HTAB) ":" SWS

   Правило TEXT-UTF8 используется только для описательного содержимого полей и
   значения, которые не предназначены для интерпретации синтаксическим анализатором сообщений.Слова *TEXT-UTF8 содержат символы из кодировки UTF-8 (RFC
   2279 [7]). Правило TEXT-UTF8-TRIM используется для описательного поля.
   содержимое, которое не является строкой в ​​кавычках, где начальный и конечный LWS
   не имеет смысла. В этом отношении SIP отличается от HTTP, который использует
   набор символов ISO 8859-1.

      TEXT-UTF8-TRIM = 1*TEXT-UTF8char *(*LWS TEXT-UTF8char)
      ТЕКСТ-UTF8char = %x21-7E/UTF8-NONASCII
      UTF8-NONASCII = %xC0-DF 1UTF8-CONT
                      / %xE0-EF 2UTF8-CONT
                      / %xF0-F7 3UTF8-ПРОДОЛЖ.
                      / %xF8-Fb 4UTF8-CONT
                      / %xFC-FD 5UTF8-CONT
      UTF8-CONT = %x80-BF
 

Как добраться между терминалами в международном аэропорту Атланты [ATL]

Международный аэропорт Хартсфилд-Джексон Атланты (ATL) — большой и чрезвычайно загруженный аэропорт.

Фактически, ATL является самым загруженным аэропортом в мире, перевозящим более 100 миллионов пассажиров в год. Учитывая размер аэропорта, в простой и функциональной планировке легко ориентироваться, особенно если вы провели исследование перед посещением.

Ниже вы найдете всю необходимую информацию о пересадке между терминалами, расположение каждого зала ожидания и действия, если у вас есть стыковочный рейс.

Схема аэропорта ATL

Карта международного аэропорта Хартсфилд-Джексон Атланта.Изображение предоставлено: atl.com.

ATL имеет 2 терминала: внутренний терминал (или главный терминал) и международный терминал. Есть также 7 вестибюлей , которые являются контролируемыми зонами с дополнительными магазинами и ресторанами, а также там, где расположены выходы на посадку для вылета рейсов.

На карте выше видно, что аэропорт немного похож на рыбью кость, с внутренним терминалом в виде головы, международным терминалом в виде хвоста и вестибюлями в виде ребер. Позвоночник — это подземная транспортная система, соединяющая все воедино.

Если вы вылетаете из международного терминала, вы можете пройти контроль безопасности в терминале внутренних рейсов и наоборот, если у вас есть действующий посадочный талон. Если вы летите с зарегистрированным багажом, вам нужно будет проверить, есть ли у вашей авиакомпании оборудование для регистрации в выбранном вами терминале, или, если вы летите только с ручной кладью, вам нужно будет пройти регистрацию. в онлайн и иметь распечатанный или мобильный посадочный талон.

У вас есть несколько вариантов перемещения между терминалами и залами ожидания.

Служба безопасности наземного транспорта ATL (зона общего доступа)

Вы можете перемещаться между внутренним и международным терминалами (без прохождения службы безопасности), воспользовавшись услугой трансфера до аэропорта .

Если вы прибываете со станции MARTA или из других точек входа на западной стороне внутреннего терминала, вам необходимо войти через дверь W2 в зону выдачи багажа Южного терминала. Отсюда вы можете следовать указателям на наземный транспорт, где вы можете сесть на маршрутный автобус, чтобы добраться до международного терминала.

В международном терминале вы можете сесть на маршрутный автобус из северной части терминала через двери A1, A2 или A3. Поездка на шаттле между терминалами занимает около 12 минут.

ATL Наземный транспорт Пост безопасности (воздушная зона)

Самолет Поезд. Изображение предоставлено: atl.com.

Поезд-самолет , , расположенный на уровне 0, является одним из самых простых способов передвижения по ATL, он работает 24 часа в сутки и отправляется каждые 2 минуты. Спуститесь на эскалаторе или лифте на нижний уровень, где будет обозначен поезд-самолет.

Самолет курсирует по 3-мильной петле между внутренним терминалом (выдача багажа) и залом F (международный терминал), останавливаясь по пути в залах T, A, B, C, D и E. Таймер обратного отсчета предупреждает пассажиров о прибытии следующего поезда-самолета, а на борту есть автоматические объявления и карты, которые помогут вам спланировать свой маршрут.

Доступ к эскалаторам и лифтам возможен с каждой остановки, а между поездом и платформой практически нет зазора. Если вам требуется помощь в инвалидной коляске, вы можете сообщить об этом сотрудникам службы безопасности аэропорта, и вам помогут.

У вас также есть возможность прогуляться по транспортному центру , который находится на том же уровне, что и поезд-самолет (уровень 0). По пути есть движущиеся дорожки и несколько интересных художественных и исторических экспонатов.

Знаки аэропорта указывают на то, что между вестибюлями находится 5 минут ходьбы (кроме E-F, который составляет 10 минут), так что имейте это в виду, если вы спешите. Например, прогулка от зала A до F займет около 35 минут, тогда как самолетный поезд займет всего несколько минут и отправляется каждые 2 минуты.

Как только вы доберетесь до зала отправления, вам нужно будет подняться на эскалаторе или лифте до зоны отправления (уровень 2), где вы сможете пройти к выходу на посадку. В отдельных вестибюлях нет движущихся дорожек, поэтому доступны электронные тележки, чтобы помочь пассажирам с любыми проблемами мобильности.

Внутренний терминал ATL

Внутренний терминал международного аэропорта Хартсфилд-Джексон Атланта. Изображение предоставлено: atl.com.

Терминал внутренних рейсов расположен на западной стороне аэропорта и далее разделен на север и юг атриумом.Delta Air Lines занимает Южный терминал с собственной зоной выдачи багажа и стойкой регистрации.

Другие внутренние авиалинии, такие как Southwest Airlines, United Airlines, Spirit Airlines, Alaska Airlines и JetBlue Airways, работают из Северного терминала с зоной выдачи багажа и средствами регистрации. В United есть специальная зона выдачи багажа, расположенная на уровне земли, до которой можно добраться с помощью нескольких эскалаторов и лифтов.

Железнодорожная станция MARTA расположена во внутреннем терминале, поэтому, если вы прибываете или вылетаете из внутреннего терминала, но летите из международного терминала, вам нужно будет использовать варианты наземного транспорта, описанные ранее.

В атриуме расположено множество магазинов, ресторанов и различных служб аэропорта, а после прохождения службы безопасности в вестибюлях открывается еще больше магазинов и ресторанов.

В терминале внутренних рейсов есть 3 контрольно-пропускных пункта: главный контрольно-пропускной пункт, самый большой, северный контрольно-пропускной пункт и южный контрольно-пропускной пункт. После прохождения контроля безопасности вы окажетесь в зале T.

Выходы отмечены в соответствии с их залом, например, T14 находится в зале T.Все вестибюли, кроме вестибюля T, имеют ворота с обеих сторон, ворота с нечетными номерами на восточной стороне и ворота с четными номерами на западной стороне.

Длина каждого вестибюля составляет около полумили, а точка входа находится посередине, поэтому вам потребуется около 5 минут, чтобы дойти до самых дальних ворот от точки входа на полпути.

Зал T

Международный аэропорт Хартсфилд-Джексон Атланта Зал T. Изображение предоставлено: atl. com.

Зал T является частью здания терминала внутренних рейсов и обслуживает выходы с T1 по T15.Delta, WestJet Airlines, United и другие перевозчики работают из этого зала.

При прохождении контроля безопасности из терминала внутренних рейсов вы попадете прямо в вестибюль, где в зависимости от номера выхода вам нужно будет пройти направо или налево. Ворота с T1 по T8 находятся справа, а ворота с T9 по T17 — слева.

Зал A

Хартсфилд-Джексон Международный аэропорт Атланты Зал A. Изображение предоставлено: atl.com.

Зал А состоит из 34 выходов на посадку, многие из которых принадлежат компании Delta.Центр обслуживания билетов Delta расположен напротив выхода A18, центр самообслуживания Delta — у выхода A27, а лаундж Delta Sky Club — рядом с выходом A17.

Если вы прибываете из терминала внутренних рейсов, выходы с A1 по A18 находятся справа, а с A19 по A34 — слева.

Зал B

Хартсфилд-Джексон Международный аэропорт Атланты Зал B. Изображение предоставлено: atl. com.

Зал B имеет 35 физических выходов, но 35-й выход на самом деле помечен как B36. Это может быть сделано для того, чтобы оставаться в соответствии с нечетной и четной нумерацией ATL, определяющей, на какой стороне вестибюля находятся ворота.

Если вы прибываете из терминала внутренних рейсов, выходы с B1 по B18 находятся справа, а выходы с B19 по B36 — слева. Как и в случае с залом A, в этом зале доминирует Delta, но другие авиакомпании также выполняют рейсы отсюда.

Центр обслуживания билетов Delta и центр самообслуживания Delta расположены рядом с выходом на посадку B9, а также лаундж Delta Sky Club в центральной части.

Зал C

Международный аэропорт Хартсфилд-Джексон Атланта Зал C. Изображение предоставлено: atl.ком.

Зал C имеет 47 физических выходов, но выходы пронумерованы C1-C22, C30-C53 и C55. Если вы подходите к залу C из терминала внутренних рейсов, то выходы с C1 по C22 будут справа, а выходы с C30 по C53 и выходы C55 — слева.

Центр обслуживания билетов Delta Connection расположен у выхода C40, а зал ожидания Delta Sky Club у выхода C37.

Зал D

Международный аэропорт Хартсфилд-Джексон Атланта Зал D. Изображение предоставлено: atl.com.

Зал D имеет 41 выход на посадку.Если вы прибываете из терминала внутренних рейсов, то выходы с D1 по D16, включая D1A, D8A и D11A, расположены справа, а выходы с D21 по D35, выходы с D38 по D42, D44 и D46 расположены слева.

В вестибюле есть лаундж United Club, расположенный рядом с выходом на посадку D12, и лаундж Delta Sky Club, расположенный рядом с выходом на посадку D27.

Международный терминал ATL

Международный терминал расположен в восточной части аэропорта, и большинство международных рейсов выполняются из залов E и F.Вылеты находятся на уровне 2, где есть стойки регистрации таких авиакомпаний, как Delta, Virgin Atlantic, Lufthansa и British Airways.

Уровень 2 также является местом, где пассажиры проходят через контроль безопасности, чтобы попасть в контролируемую зону в зал F. Отсюда вы можете подняться на эскалаторе или лифте на уровень 0 и проехать на поезде-самолете или пройти по пешеходной дорожке до зала E. Вы также можете сесть на поезд или дойти до любого другого зала внутреннего терминала. Время, необходимое для того, чтобы пройти от зала F до E, составляет около 10 минут.

Зал прибытия находится на уровне U с зоной выдачи багажа и услугами наземного транспорта для такси, арендованных автомобилей и трансферов из отеля/парка. Отсюда также отправляется шаттл к терминалу внутренних рейсов.

Мезонин 3-го уровня является домом для клуба ATL, лаунджей Delta Sky Club, а также нескольких магазинов и ресторанов.

Зал E

Международный аэропорт Хартсфилд-Джексон Атланта Зал E. Изображение предоставлено: atl.com.

Зал E состоит из 28 выходов, пронумерованных от E1 до E12, от E14 до E18 и от E26 до E36.Чтобы добраться до зала E из международного терминала, пассажиры должны пройти через зону безопасности в зал F, где затем можно сесть на самолет или пройти по уровню U до зала E.

Если вы прибываете с пешеходной дорожки на восточной стороне зала E , у вас будут выходы E18, E16 и E14 с правой стороны вестибюля, а выходы E17 и E15 — с левой.

Для всех остальных выходов вам нужно будет пройти через вестибюль, пока не дойдете до перекрестка, где выходы с E1 по E12 находятся слева, а выходы с E26 по E36 — справа.

Если вы прибываете с поезда-самолета на западной стороне зала E, вы войдете в перекресток, где выходы с E1 по E12 находятся справа, а выходы с E26 по E36 — слева. Для ворот с E14 по E18 вам нужно будет двигаться прямо через поперечное сечение.

В зале E есть зал ожидания Delta Sky Club напротив выхода E14 и билетная касса Delta на перекрестке.

Зал F

Международный аэропорт Хартсфилд-Джексон Атланта Зал F.Изображение предоставлено: atl.com.

Зал F находится в контролируемой зоне международного терминала. Для вылетающих пассажиров: после прохождения контроля безопасности вы попадаете в переходный зал вестибюля F, где можете подняться на лифте или эскалаторе на уровень U для дальнейшего перемещения в другие вестибюли.

Зал F состоит из 12 выходов, пронумерованных от F1 до F10, F12 и F14. При прохождении через контрольно-пропускной пункт Международного терминала выходы с F1 по F10 находятся слева, а выходы с F12 и F14 — справа.Зал F составляет примерно половину длины других залов, его размеры составляют около четверти мили, поэтому, как только вы прибудете в контролируемую зону от службы безопасности, вам потребуется всего несколько минут, чтобы дойти до выхода на посадку.

На уровне прибытия пассажиры проходят паспортный контроль, прежде чем попасть в зону получения багажа в международном терминале.

Стыковка рейсов в ATL

Зал международного аэропорта Хартсфилд-Джексон F. Изображение предоставлено: atl.com. Относительно простая компоновка

ATL делает стыковку рейсов довольно простой.Независимо от того, куда вы направляетесь или откуда, все пассажиры должны пройти паспортный контроль по прибытии в ATL, и он будет обработан в зале ожидания, в который вы прибыли.

Все пассажиры также должны пройти в зону выдачи багажа для прохождения таможни. Пассажиры стыковочных рейсов будут иметь указатели, ведущие в комнату регистрации багажа, где можно сдать сумку для следующего этапа путешествия, при условии, что ваш багаж помечен до конечного пункта назначения.

Пассажирам, забронировавшим билеты на следующий рейс самостоятельно, если у перевозчика нет стойки регистрации в международном терминале, вам нужно будет сесть на маршрутный автобус до терминала внутренних рейсов, чтобы зарегистрироваться на следующий рейс.

Пассажиры с пересадками с внутренних рейсов на внутренние или с внутренних на международные стыковочные не должны повторно проходить проверку безопасности.

Тем не менее, пассажиры, совершающие пересадку с международных рейсов на внутренние или международные и международные с стыковкой , должны будут снова пройти проверку безопасности. После того, как вы пройдете контроль безопасности, вы можете сесть на поезд-самолет или по пешеходной дорожке к выходу на посадку.

Доступность

Оба терминала и все 7 залов доступны для пассажиров с ограниченными физическими возможностями, инвалидов и инвалидов-колясочников. Есть несколько лифтов для подключения к разным уровням, в том числе уровень 0 для доступа к подземным туннелям и поезд-самолет, который также доступен для пользователей в инвалидных креслах.

Заключительные мысли

В целом, функциональная планировка ATL и четкие указатели означают, что в этом аэропорту относительно легко ориентироваться.Пока вы знаете, из какого терминала вылетаете, или что у вас есть возможность пройти через альтернативный терминал, навигация по ATL может быть легкой. Даже если вы окажетесь не в том конце аэропорта, бесплатный автобус доставит вас туда, куда вам нужно, всего за 12 минут.

Поскольку ATL обслуживает очень много пассажиров, выделите достаточно времени для прохождения контроля безопасности и прибытия к выходу на посадку. Хотя вы можете попытаться заранее выяснить, к какому номеру выхода прибывали прошлые рейсы, эти ворота всегда могут быть изменены. Оставьте достаточно времени, чтобы сесть на поезд-самолет или прогуляться по пешеходной аллее, любуясь интересными и причудливыми художественными экспонатами.

В настоящее время у вас недостаточно прав для чтения этого закона

В настоящее время у вас недостаточно прав для чтения этого закона Логотип Public.Resource.OrgЛоготип представляет собой черно-белый рисунок улыбающегося тюленя с усами. Вокруг печати находится красная круглая полоса с белым шрифтом, на которой в верхней половине написано «The Creat Seal of the Seal of Approval», а в нижней половине «Public.Resource.Org». На внешней стороне красной круглой марки находится круглая серебряная круглая полоса с зубчатыми краями, призванная вызвать печать из серебряной фольги.

Public.Resource.Org

Хилдсбург, Калифорния, 95448
США

Этот документ в настоящее время недоступен для вас!

Дорогой земляк:

В настоящее время вам временно отказано в доступе к этому документу.

Public Resource судится за ваше право читать и высказываться в соответствии с законом. Для получения более подробной информации см. досье этого незавершенного судебного дела:

Американское общество испытаний и материалов (ASTM), Национальная ассоциация противопожарной защиты (NFPA), и Американское общество инженеров по отоплению, охлаждению и кондиционированию воздуха (ASHRAE) против Public.Resource.Org (Общественный ресурс), DCD 1:13-cv-01215, Объединенный окружной суд округа Колумбия [1]

Ваш доступ к этому документу, который является законом Соединенных Штатов Америки, был временно отключен, пока мы боремся за ваше право читать и говорить о законах, по которым мы хотим управлять собой как демократическим обществом.

Чтобы подать заявку на получение лицензии на чтение этого закона, ознакомьтесь со Сводом федеральных правил или применимыми законами и правилами штата. для имени и адреса поставщика. Для получения дополнительной информации о указах правительства и ваших правах как гражданина в соответствии с верховенством права , пожалуйста, прочтите мое свидетельство перед Конгрессом Соединенных Штатов. Более подробную информацию о нашей деятельности вы можете найти на сайте Public Resource. в нашем реестре деятельности 2015 года. [2][3]

Благодарим вас за интерес к чтению закона.Информированные граждане являются фундаментальным требованием для того, чтобы наша демократия работала. Я ценю ваши усилия и приношу извинения за неудобства.

С уважением,

Карл Маламуд
Public.Resource.Org
7 ноября 2015 г.

Примечания

[1]   http://www.archive.org/download/gov.uscourts.dcd.161410/gov.uscourts.dcd.161410.docket.html

[2]   https://public.resource.org/edicts/

[3]   https://public.resource.org/pro.docket.2015.HTML

.